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碇元渡

至尊木虫 (著名写手)

应助: 1 (幼儿园)
金币: 14450.8
散金: 200
帖子: 2561
在线: 33.6小时
虫号: 2120595
注册: 2012-11-08
性别: GG
专业: 发育生物学

[求助] 求助RT-PCR引物验证的方法已有1人参与

本人要做干细胞成脂分化的实验，,相通过RT-PCR的方法检测分化后的细胞中目的基因的表达量。订购了RT-PCR要用的内参引物和目的基因引物，但刚刚接触RT-PCR，不知道怎么验证内参引物好用不好用，需要看哪些参数，比如熔解曲线之类。烦请大家提供一下粗略的方案、方法。

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她是我的梦工厂。

1楼 2017-09-30 13:08:15

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

山还在那儿

银虫 (小有名气)

应助: 16 (小学生)
金币: 336.5
散金: 135
红花: 1
帖子: 211
在线: 282.9小时
虫号: 1458744
注册: 2011-10-24
性别: GG

【答案】应助回帖

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感谢参与，应助指数 +1
碇元渡: 金币+100, ★★★★★最佳答案, 谢谢 2017-10-03 09:41:17

验证RT-PCR体系（引物）好坏，一般通过标准曲线验证：
1.RT-PCR曲线应顺滑，拐点清楚，基线期，指数期，平台期三期明显；
2.扩增效率应在90%-110%之间；
3.如果是染料法，溶解曲线仅有一个主峰；’
4.NTC不加模板的对照应无扩增曲线，或者扩增曲线起峰时间大于35个循环；

如有其它问题，欢迎及时沟通，祝实验顺利！

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