| 查看: 2377 | 回复: 8 | ||
[求助]
质粒提取问题 已有1人参与
|
|
我做了点突，送去测序正确，然后用剩余质粒进行转化然后涂板，菌可以长起来，然后那LB培养基进行摇菌，12个多小时摇不起来菌～你知道要怎么办？ 发自小木虫IOS客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有63人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
-
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用
已经有0人回复
-
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点
已经有0人回复
-
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用
已经有0人回复
-
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点
已经有0人回复
-
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？
已经有0人回复
-
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析
已经有0人回复
-
矢车菊素-3-O-葡萄糖苷质控实录：从一张HPLC图谱读懂纯度与稳定性
已经有0人回复
2楼2017-09-30 12:40:48
晋鹏
版主 (知名作家)
- MolEPI: 6
- 应助: 626 (博士)
- 贵宾: 0.096
- 金币: 27592.6
- 散金: 1052
- 红花: 288
- 沙发: 2
- 帖子: 5663
- 在线: 726.4小时
- 虫号: 1183978
- 注册: 2011-01-05
- 性别: GG
- 专业: 生物信息学
- 管辖: 农林
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+4, 鼓励回帖交流 2017-10-01 09:45:47
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+4, 鼓励回帖交流 2017-10-01 09:45:47
|
我觉得有两方面你可以注意下： 1、片断产物有毒，细菌都死掉了。 这是我以前遇到过的情况，过夜摇菌后，第二天可见，细菌聚集成颗粒状，提得质粒浓度很低，后来发现是细菌都死掉了，质粒降解了，所以量很低，可能目的基因所表达的蛋白对细菌有毒，后来我换了一下菌株，使用Xl－blue，提质粒就好了。 2、有无杂菌污染，Amp培养基摇菌时，由于细菌会把Amp抗生素(antibiotic)降解掉，造成抗生浓度降低，后果就是无抗性细菌疯狂生长，原因就是在抗性菌和非抗性菌都能生长的条件下，非抗性菌具有生长优势，另外菌体里含质粒拷贝数低的细菌较高的细菌具有生长优势。所以大提质粒时，要从新鲜平板上挑取单克隆细菌去摇菌，避免杂菌干扰质粒抽提，过夜培养的时间不要过长。 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
3楼2017-09-30 20:13:12
|
谢谢您，我的质粒是在做点突，所以应该可以排除片段有毒，而且过夜摇菌的培养基很清澈。 现在怀疑是不是板子或者Amp+的问题，真的很疑惑～因为我也是重新用测序正确的质粒重新进行转化，LB也没问题，板子长得也不错， 也确定挑出来菌了。现在很疑惑 发自小木虫IOS客户端 |
4楼2017-09-30 21:11:02
送红花一朵 |
谢谢您，我的质粒是在做点突，所以应该可以排除片段有毒，而且过夜摇菌的培养基很清澈。 现在怀疑是不是板子或者Amp+的问题，真的很疑惑～因为我也是重新用测序正确的质粒重新进行转化，LB也没问题，板子长得也不错， 也确定挑出来菌了。现在很疑惑，谢谢您 发自小木虫IOS客户端 |
5楼2017-09-30 22:25:31
ULYSSEESWB
铁杆木虫 (正式写手)
- 应助: 39 (小学生)
- 金币: 7653.9
- 散金: 2508
- 红花: 7
- 帖子: 596
- 在线: 1105.6小时
- 虫号: 939000
- 注册: 2010-01-08
- 专业: 药理学其他科学问题
6楼2017-10-01 08:47:55
7楼2017-10-01 19:24:44
8楼2017-10-03 13:26:16
9楼2017-10-04 10:27:17