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质粒提取问题 已有1人参与
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我做了点突，送去测序正确，然后用剩余质粒进行转化然后涂板，菌可以长起来，然后那LB培养基进行摇菌，12个多小时摇不起来菌～你知道要怎么办？ 发自小木虫IOS客户端 |
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送红花一朵 |
谢谢您，我的质粒是在做点突，所以应该可以排除片段有毒，而且过夜摇菌的培养基很清澈。 现在怀疑是不是板子或者Amp+的问题，真的很疑惑～因为我也是重新用测序正确的质粒重新进行转化，LB也没问题，板子长得也不错， 也确定挑出来菌了。现在很疑惑，谢谢您 发自小木虫IOS客户端 |
5楼2017-09-30 22:25:31
晋鹏
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感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+4, 鼓励回帖交流 2017-10-01 09:45:47
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西门吹雪170: 金币+4, 鼓励回帖交流 2017-10-01 09:45:47
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我觉得有两方面你可以注意下： 1、片断产物有毒，细菌都死掉了。 这是我以前遇到过的情况，过夜摇菌后，第二天可见，细菌聚集成颗粒状，提得质粒浓度很低，后来发现是细菌都死掉了，质粒降解了，所以量很低，可能目的基因所表达的蛋白对细菌有毒，后来我换了一下菌株，使用Xl－blue，提质粒就好了。 2、有无杂菌污染，Amp培养基摇菌时，由于细菌会把Amp抗生素(antibiotic)降解掉，造成抗生浓度降低，后果就是无抗性细菌疯狂生长，原因就是在抗性菌和非抗性菌都能生长的条件下，非抗性菌具有生长优势，另外菌体里含质粒拷贝数低的细菌较高的细菌具有生长优势。所以大提质粒时，要从新鲜平板上挑取单克隆细菌去摇菌，避免杂菌干扰质粒抽提，过夜培养的时间不要过长。 |
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3楼2017-09-30 20:13:12
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谢谢您，我的质粒是在做点突，所以应该可以排除片段有毒，而且过夜摇菌的培养基很清澈。 现在怀疑是不是板子或者Amp+的问题，真的很疑惑～因为我也是重新用测序正确的质粒重新进行转化，LB也没问题，板子长得也不错， 也确定挑出来菌了。现在很疑惑 发自小木虫IOS客户端 |
4楼2017-09-30 21:11:02
ULYSSEESWB
铁杆木虫 (正式写手)
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6楼2017-10-01 08:47:55
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