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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白/酶 » 求助固定化酶问题
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回首又见

银虫 (小有名气)

[求助] 求助固定化酶问题 已有1人参与

刚刚开始接触固定化酶，看了一些文献。有一个小小的问题：为什么做固定化酶都用摇床呢？用搅拌会有什么影响呢？

另外，测定固定化酶的蛋白固定率，其中用考马斯亮蓝法测定载体上的蛋白总量，和测未固定的蛋白总量方法是一样的吗？也就是说，考马斯亮蓝法可以测定非溶液状态的蛋白质含量吗？还是用差值计算？
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1楼 2017-09-26 16:18:56
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becky105

铁虫 (小有名气)
可以用搅拌的，不一定要用摇床。至于能不能用考马斯亮蓝测固定化酶应该看你的固定化方式吧，建议两种方法都试一下

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2楼2017-10-02 03:57:54
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回首又见

银虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by becky105 at 2017-10-02 03:57:54
可以用搅拌的，不一定要用摇床。至于能不能用考马斯亮蓝测固定化酶应该看你的固定化方式吧，建议两种方法都试一下

谢谢您。那么大多数文章里用摇床的原因是什么呢？是因为搅拌会降低酶活性吗？
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3楼2017-10-09 11:20:28
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Goodbo

新虫 (初入文坛)
我师姐做固定化的，她用手动搅拌。但是这样就会存在一个问题，就是手感很重要。而摇床的话，相对比较固定。

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4楼2017-12-13 23:24:59
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Goodbo

新虫 (初入文坛)
固定率总差值计算。对照组不加载体，其他都加。离心，清液测蛋白浓度。实验组取固定化后的清液，测蛋白浓度。求差值。但是我现在遇到一个问题是，酶液加到固定化体系中，浓度很小，固定化后清液蛋白浓度更小。用考马斯亮蓝法测，误差很大。

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5楼2017-12-13 23:35:41
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豆豆豆花儿

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
5楼: Originally posted by Goodbo at 2017-12-13 23:35:41
固定率总差值计算。对照组不加载体，其他都加。离心，清液测蛋白浓度。实验组取固定化后的清液，测蛋白浓度。求差值。但是我现在遇到一个问题是，酶液加到固定化体系中，浓度很小，固定化后清液蛋白浓度更小。用考马 ...

请问您这个固定化酶活怎么测定的

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6楼2018-01-03 17:19:26
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