版块导航: 正在加载中...

客户端APP下载

登录注册

应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜

>论坛更新日志 (4659)
>休闲灌水 (497)
>虫友互识 (389)
>导师招生 (357)
>文献求助 (335)
>论文投稿 (196)
>博后之家 (175)
>招聘信息布告栏 (135)
>硕博家园 (69)
>学术会议 (67)
>考博 (63)
>找工作 (45)
>基金申请 (40)
>教师之家 (36)
>育儿交流 (33)
>有机交流 (30)

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

安宝贝

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 254.7
散金: 10
红花: 3
帖子: 185
在线: 27.4小时
虫号: 5597547
注册: 2017-02-16
性别: MM
专业: 生物物理、生物化学与分子

[求助] 小白白一枚，求助大神

昨天做PCR，师兄让先练手，跟另外两个同学一起做，他们两个的待扩增片段都是1000多bp，我的是645bp，放在同一个PCR仪中，按照的是95℃5min.95℃30s，57℃45s，72℃1min，72℃10min，35个循环，其他两个同学扩增出的条带都很亮，我的目的条带就比较暗，不够回收，今天中午要重新做，求助大神我应该怎么设定程序提高特异性，让产物多一些。
引物F：Tm61.2℃，引物R：Tm62℃.GC含量:F40%多一点点，R不到40%，差一点点

发自小木虫Android客户端

» 猜你喜欢

ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点已经有0人回复
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？已经有0人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有253人回复
His标签蛋白纯化怎么才能快？已经有0人回复
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析已经有0人回复
KRAS G12V(ON) 选择性抑制剂 RMC-5127：从三元复合物机制到科研应用已经有0人回复
SHP2 变构抑制剂 Sitneprotafib：从作用机制到科研试剂选型要点已经有0人回复
PRMT5·MTA 抑制剂 MRTX1719 的科研应用已经有0人回复
SW033291 科研使用解析：分子特征、储存与实验获取要点已经有0人回复
泛 RAS 抑制新思路：大环肽拟似物如何同时牵住突变型与野生型 RAS？已经有0人回复
TYK2/JAK1 双靶点工具化合物 Brepocitinib：激酶选择性、研究进展与实验应用全解析已经有0人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

本人MATLAB小白一枚，再次求助各位大神已经有3人回复
求助，浙大化工专业博导推荐已经有2人回复
大神们，求助镁合金电化学交流阻抗等效电路已经有5人回复
小白求助已经有21人回复
小白一枚，手里有一篇机械类文章，想发个C，求大神指导，发哪个期刊最容易中。已经有0人回复
有关MATLAB的一个非线性拟合曲线的问题，寻找大神，我在这里，你在哪？已经有5人回复
FLUENT模拟非稳态自激振荡射流，得到的残差图是平稳，这正常吗？求助各位大神已经有5人回复
原核表达蛋白时不加诱导剂也有目的蛋白表达，怎么回事？已经有2人回复
本科小白一枚，求助各位大神！液相相关。已经有3人回复
小白一枚，求助各位大神~今年刚毕业的硕士，想出国读博该从哪里入手啊！！！已经有11人回复
求助合成MnO2的文献及方法，忘各位大神不吝赐教。已经有1人回复
完全不知道具体流程，求助大神们已经有3人回复
matlab非线性拟合模型参数，大神你在哪！已经有73人回复
QAQ新虫跪求大神鉴定，有没有可能设计暴雨的出流过程是这样的奇葩图？？？已经有4人回复

1楼 2017-09-26 07:50:31

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

安宝贝

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 254.7
散金: 10
红花: 3
帖子: 185
在线: 27.4小时
虫号: 5597547
注册: 2017-02-16
性别: MM
专业: 生物物理、生物化学与分子

引用回帖:

3楼: Originally posted by yangmeng0711 at 2017-09-26 08:32:32
延伸时间长一点，退火温度和时间优化一下

能能具体点怎么优化么？我也知道是程序有问题

发自小木虫Android客户端

4楼2017-09-26 09:04:13

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

查看全部 7 个回答

安宝贝

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 254.7
散金: 10
红花: 3
帖子: 185
在线: 27.4小时
虫号: 5597547
注册: 2017-02-16
性别: MM
专业: 生物物理、生物化学与分子

体系50，水35，buffer5，dNTPs4，F2，R2，DNA1.5，taq0.5

发自小木虫Android客户端

2楼2017-09-26 07:59:08

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

yangmeng0711

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1558.5
散金: 66
帖子: 95
在线: 19.3小时
虫号: 3768914
注册: 2015-03-27
性别: GG
专业: 微生物生理与生物化学

延伸时间长一点，退火温度和时间优化一下

发自小木虫IOS客户端

3楼2017-09-26 08:32:32

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

yangmeng0711

新虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 1558.5
散金: 66
帖子: 95
在线: 19.3小时
虫号: 3768914
注册: 2015-03-27
性别: GG
专业: 微生物生理与生物化学

★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-09-27 07:46:35

退火温度以二度为梯度优化，退火时间根据你用的是什么酶上面有说明书，还有你模版的量，引物的量，包括你的延伸时间要根据你的目标基因长短而定，可以稍微长一点

发自小木虫IOS客户端

赞一下(1人)

5楼2017-09-26 16:57:09

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

查看全部 7 个回答