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[求助]
小白白一枚，求助大神
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昨天做PCR，师兄让先练手，跟另外两个同学一起做，他们两个的待扩增片段都是1000多bp，我的是645bp，放在同一个PCR仪中，按照的是95℃5min.95℃30s，57℃45s，72℃1min，72℃10min，35个循环，其他两个同学扩增出的条带都很亮，我的目的条带就比较暗，不够回收，今天中午要重新做，求助大神我应该怎么设定程序提高特异性，让产物多一些。 引物F：Tm61.2℃，引物R：Tm62℃.GC含量:F40%多一点点，R不到40%，差一点点 发自小木虫Android客户端 |
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2楼2017-09-26 07:59:08
yangmeng0711
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- 专业: 微生物生理与生物化学
3楼2017-09-26 08:32:32
4楼2017-09-26 09:04:13
yangmeng0711
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-09-27 07:46:35
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退火温度以二度为梯度优化，退火时间根据你用的是什么酶上面有说明书，还有你模版的量，引物的量，包括你的延伸时间要根据你的目标基因长短而定，可以稍微长一点 发自小木虫IOS客户端 |
5楼2017-09-26 16:57:09
6楼2017-09-26 22:46:03
7楼2017-09-27 13:16:03
