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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 载体构建要不要去掉终止子
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饿的神啊

新虫 (著名写手)

[求助] 载体构建要不要去掉终止子 已有1人参与

手上有一个载体构造如下：35S promoter-MCS-GFP-NOS，想在多克隆位点区插入目的基因的CDS序列，构建过表达载体，同时希望GFP蛋白也能表达，是不是设计引物时，CDS序列末端的终止子要删掉？另外，CDS的起始密码子前面需不需要加上Kozak序列呢
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1楼 2017-09-21 17:25:33
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yudaoqian88

至尊木虫 (知名作家)

不良人

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-09-22 07:40:40
前面的问题我是确定的，要去掉终止密码子，否则蛋白不能融合。后面的问题我不知道，我们都是直接把编码区克隆进去，不加别的序列。

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特别喜欢家门口开门的瞬间，宝宝那个高兴呀，蹦蹦跳跳，好不热闹！
2楼2017-09-21 19:32:24
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饿的神啊

新虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by yudaoqian88 at 2017-09-21 19:32:24
前面的问题我是确定的，要去掉终止密码子，否则蛋白不能融合。后面的问题我不知道，我们都是直接把编码区克隆进去，不加别的序列。

那请问插入的CDS和GFP之间多出十几个碱基没有关系吗，如果正好造成读码框移位，怎么办呢

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3楼2017-09-21 23:08:28
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ken19860823

木虫 (正式写手)
cds不带终止密码子加p2啊

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做基因修饰的老菜鸡
4楼2017-09-21 23:49:33
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ken19860823

木虫 (正式写手)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ken19860823 at 2017-09-21 23:49:33
cds不带终止密码子加p2啊

p2a

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5楼2017-09-21 23:50:05
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饿的神啊

新虫 (著名写手)
引用回帖:
5楼: Originally posted by ken19860823 at 2017-09-21 23:50:05
p2a
...

不好意思，不是很懂啊，意思是CDS去掉终止密码子，加上p2a，可是p2a是什么，怎么加，请赐教？
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6楼2017-09-22 09:16:50
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遗丶失

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
5楼: Originally posted by ken19860823 at 2017-09-21 23:50:05
p2a
...

求解+1，p2a是指什么？
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7楼2017-10-07 14:50:31
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