应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » 体外转录
北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
51/1返回列表
查看: 4874  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

饿的神啊

新虫 (著名写手)

[求助] 体外转录 已有1人参与

想要体外转录dsRNA，已经在上下游引物的5'端都加了T7启动子序列，但是胶回收得率很低，只有大概40ng/ul，远达不到体外转录试剂盒要求的起始模板量，所以想将PCR产物克隆到带T7启动子的载体上，比如pEASY-T1-simple，现在问题是这类的载体的T7启动子离插入片段都至少有几十bp的距离，我想问这几十bp的非目的片段是否会影响体外转录后生成的dsRNA，急求
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关商家推荐: (我也要在这里推广)
1楼 2017-09-15 11:27:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

饿的神啊

新虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2017-09-15 13:17:26
私觉得，后面有一串也没有太大问题，否则就没有神马载体可以用于转录了。
浓度低两个办法
1. 多切载体，多回收，回收的时候如果片段小于350bp，就在溶胶之后上柱之前加1/3体积的异丙醇。
2. 把你的目的片段放到载 ...

关于第2点，“ 把你的目的片段放到载体里之后，用高保真酶进行PCR，然后挥手PCR产物，用于体外转录”，目的片段放到载体里面后为什么还要PCR啊，不是直接线性化，然后纯化质粒就可以用作反转录模板了吗？
赞一下 回复此楼
4楼2017-09-15 14:48:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
饿的神啊: 金币+20, ★★★很有帮助 2017-09-21 17:20:09
私觉得，后面有一串也没有太大问题，否则就没有神马载体可以用于转录了。
浓度低两个办法
1. 多切载体，多回收，回收的时候如果片段小于350bp，就在溶胶之后上柱之前加1/3体积的异丙醇。
2. 把你的目的片段放到载体里之后，用高保真酶进行PCR，然后挥手PCR产物，用于体外转录。
赞一下 回复此楼
2楼2017-09-15 13:17:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

饿的神啊

新虫 (著名写手)
引用回帖:
2楼: Originally posted by kangaroo0513 at 2017-09-15 13:17:26
私觉得，后面有一串也没有太大问题，否则就没有神马载体可以用于转录了。
浓度低两个办法
1. 多切载体，多回收，回收的时候如果片段小于350bp，就在溶胶之后上柱之前加1/3体积的异丙醇。
2. 把你的目的片段放到载 ...

关于第2点，“ 把你的目的片段放到载体里之后，用高保真酶进行PCR，然后挥手PCR产物，用于体外转录”，目的片段放到载体里面后为什么还要PCR啊，不是直接线性化，然后纯化质粒就可以用作反转录模板了吗？
赞一下 回复此楼
3楼2017-09-15 14:48:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

kangaroo0513

新虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
4楼: Originally posted by 饿的神啊 at 2017-09-15 14:48:59
关于第2点，“ 把你的目的片段放到载体里之后，用高保真酶进行PCR，然后挥手PCR产物，用于体外转录”，目的片段放到载体里面后为什么还要PCR啊，不是直接线性化，然后纯化质粒就可以用作反转录模板了吗？...

PCR产量大，我指的PCR是连T7和你的基因一起P下来。有些表达载体或者基因插入之后，质粒拷贝数会很低，这样还不如PCR产量高。。。
赞一下 回复此楼
5楼2017-09-15 16:46:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 337求调剂 +5 《树》 2026-03-29 5/250 2026-03-30 07:38 by Iveryant
[考研] 22408 359分调剂 +4 Qshers 2026-03-27 6/300 2026-03-29 14:16 by Qshers
[考研] 求调剂，一志愿 南京航空航天大学 ，080500材料科学与工程学硕，总分289分 +7 @taotao 2026-03-29 7/350 2026-03-29 12:03 by longlotian
[考研] 0856材料化工调剂 总分330 +14 zhubinhao 2026-03-27 14/700 2026-03-29 10:01 by Sjndkwm
[考研] 本科双非材料，跨考一志愿华电085801电气，283求调剂，任何专业都可以 +6 芝士雪baoo 2026-03-28 8/400 2026-03-29 08:16 by 松花缸1201
[考研] 329求调剂 +7 星野? 2026-03-26 7/350 2026-03-29 06:43 by 544594351
[考研] 11408软件工程求调剂 +3 Qiu学ing 2026-03-28 3/150 2026-03-28 21:50 by zhq0425
[考研] 食品工程专硕一志愿中海洋309求调剂 +4 小张zxy张 2026-03-26 8/400 2026-03-28 19:25 by lbsjt
[考研] 346求调剂 一志愿070303有机化学 +3 萝卜炖青菜 2026-03-28 3/150 2026-03-28 14:11 by 唐沐儿
[考研] 308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-27 7/350 2026-03-28 07:43 by 热情沙漠
[考研] 安徽大学专硕生物与医药专业(086000)324分，英语已过四六级，六级521，求调剂 +4 美味可乐鸡翅 2026-03-26 4/200 2026-03-27 15:27 by 星空星月
[考研] 085600材料与化工调剂 +10 A-哆啦Z梦 2026-03-23 16/800 2026-03-27 15:13 by caszguilin
[考研] 求调剂323材料与化工 +7 1124361 2026-03-24 7/350 2026-03-27 10:22 by wangjy2002
[考研] 324求调剂 +8 hanamiko 2026-03-26 10/500 2026-03-27 08:06 by hypershenger
[考研] 求调剂 +3 李李不服输 2026-03-25 3/150 2026-03-25 13:03 by cmz0325
[考研] 生物学学硕求调剂 +7 小羊睡着了? 2026-03-23 10/500 2026-03-25 02:24 by 清风拂扬。 m
[有机交流] 有机合成求助 20+3 FENGSHUJEI 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:31 by 88817753
[考研] 材料考研调剂生 +3 黄粱一梦千年 2026-03-24 3/150 2026-03-24 17:00 by barlinike
[考研] 一志愿南航材料专317分求调剂 +5 炸呀炸呀炸薯条 2026-03-23 5/250 2026-03-24 16:52 by 星空星月
[考研] 344求调剂 +3 desto 2026-03-24 3/150 2026-03-24 10:09 by 搏击518
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭