24小时热门版块排行榜    

查看: 1428  |  回复: 42
当前主题已经存档。

guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

[交流] 大肠杆菌感受态出了问题诚心请教诸位(回帖者每个奖励2个金币请版主帮忙奖励谢谢)

最近做转化忽然变得很不顺,以前1微升的质粒转化可以长出满满一平板的菌斑,但是现在忽然只有几个或者干脆没有。

非常的着急,不知道哪个地方出了问题。

培养基是一样的,氨苄抗生素也是一样的浓度,步骤也是一样的。


怀疑是感受态的问题,于是将DH5a涂平板后调取单斑培养后将菌液保存于-20度一个月左右后取出转接培养15个小时左右,然后转接培养2个半小时,再用质粒进行转化。。。。。。。。。。。。。。。。。结果。。。。。无斑或只有几个斑。。。。。。。。。。。。。。

用JM110做也是一样的结果!

快崩溃了!转化没法做,实验就做不下去了!

请各位帮我分析一下原因吧,非常感谢!

发帖的时候忘了设置金币了,请版主帮下忙吧,帮我奖励一下,谢谢

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-2 at 15:15 ]
回复此楼

» 猜你喜欢

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

figo.339

木虫 (著名写手)

★ ★
lwf991229(金币+2,VIP+0):感谢参与讨论,欢迎常来~ 2-17 12:29
我也碰到过这样的问题,做了一个月没有出来,后来换了个新的菌种就好了。估计是你的大肠杆菌有问题。
2楼2009-02-14 14:31:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

36678293

铜虫 (正式写手)

★ ★
lwf991229(金币+2,VIP+0):感谢参与讨论,欢迎常来~ 2-17 12:29
保存于-20度一个月左右后取出转接培养15个小时左右,然后转接培养2个半小时


最好是重新划线,在挑取单菌落接种,做感受态!
3楼2009-02-14 14:43:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

有区别吗?甘油保存的和重新划线的?
4楼2009-02-14 14:54:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zswx1

★ ★
lwf991229(金币+2,VIP+0):感谢参与讨论,欢迎常来~ 2-17 12:29
遇到过同样问题
是感受态的效率太低
不同人用同样方法做感受态结果会很不同
可以问别人要一管感受态做一下试验,就知道是哪的原因了
5楼2009-02-14 14:54:45
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhhl2981

木虫 (职业作家)

严重同意楼上几位的意见
6楼2009-02-14 16:10:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

★ ★
lwf991229(金币+2,VIP+0):感谢参与讨论,欢迎常来~ 2-17 12:29
于是将DH5a涂平板后调取单斑培养后将菌液保存于-20度一个月左右后取出转接培养15个小时左右,然后转接培养2个半小时,再用质粒进行转化

你是重新做了感受态还是拿感受态这么折腾……
这么折腾肯定就没有转化能力了……

感受态这东西用得少就跟公司买吧,便宜、效率高、不折腾
7楼2009-02-14 18:32:43
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

我是重新做的感受态,感受态其实也挺贵的,TAKARA的十次500元呢,别的公司不知道多少钱。
8楼2009-02-14 19:43:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

郑B.CoA

金虫 (正式写手)

如果换了大肠杆菌重做不行的话还是买吧i
9楼2009-02-14 19:50:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jqq1985

银虫 (正式写手)

感受态的菌种能力退化,用最原始的菌种重新制作感受态。
10楼2009-02-14 20:19:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 guoqin_shiyin 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 考研调剂 +6 来好运来来来 2026-03-21 7/350 2026-03-25 22:43 by 418490947
[考研] 材料与化工328分调剂 +6 。,。,。,。i 2026-03-23 6/300 2026-03-25 22:30 by 418490947
[考研] 335分 | 材料与化工专硕 | GPA 4.07 | 有科研经历 +6 cccchenso 2026-03-23 6/300 2026-03-25 22:25 by 544594351
[考研] 材料与化工304求B区调剂 +3 邱gl 2026-03-25 3/150 2026-03-25 19:03 by Ainin_
[考研] 329求调剂 +3 钮恩雪 2026-03-25 3/150 2026-03-25 14:43 by 糖加冰
[考研] 材料与化工考研调剂 +9 孅華 2026-03-22 9/450 2026-03-25 13:09 by cmz0325
[考研] 材料学硕,求调剂 6+4 糖葫芦888ll 2026-03-22 9/450 2026-03-25 11:19 by greychen00
[考研] 07化学280分求调剂 +7 722865 2026-03-23 7/350 2026-03-25 09:29 by aa331100
[考研] 化学调剂 +6 yzysaa 2026-03-21 6/300 2026-03-25 09:27 by aa331100
[考研] 0856材料专硕353求调剂 +6 NIFFFfff 2026-03-20 6/300 2026-03-24 21:02 by hello七七
[有机交流] 有机合成求助 20+3 FENGSHUJEI 2026-03-23 5/250 2026-03-24 19:31 by 88817753
[考研] 求调剂 +5 林之夕 2026-03-24 5/250 2026-03-24 17:16 by dick_runner
[考博] 26申博自荐 +3 whh869393 2026-03-24 3/150 2026-03-24 09:55 by 21018060
[考研] 308求调剂 +3 墨墨漠 2026-03-21 3/150 2026-03-22 16:54 by i_cooler
[考研] 生物学调剂 +5 Surekei 2026-03-21 5/250 2026-03-22 14:39 by tcx007
[基金申请] 山东省面上项目限额评审 +4 石瑞0426 2026-03-19 4/200 2026-03-22 08:50 by Wei_ren
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 +3 13341 2026-03-20 3/150 2026-03-21 18:28 by 学员8dgXkO
[考研] 求调剂 +3 白QF 2026-03-21 3/150 2026-03-21 13:12 by zhukairuo
[考研] 一志愿武汉理工材料工程专硕调剂 +9 Doleres 2026-03-19 9/450 2026-03-20 22:36 by JourneyLucky
信息提示
请填处理意见