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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

[交流] 大肠杆菌感受态出了问题诚心请教诸位(回帖者每个奖励2个金币请版主帮忙奖励谢谢)

最近做转化忽然变得很不顺,以前1微升的质粒转化可以长出满满一平板的菌斑,但是现在忽然只有几个或者干脆没有。

非常的着急,不知道哪个地方出了问题。

培养基是一样的,氨苄抗生素也是一样的浓度,步骤也是一样的。


怀疑是感受态的问题,于是将DH5a涂平板后调取单斑培养后将菌液保存于-20度一个月左右后取出转接培养15个小时左右,然后转接培养2个半小时,再用质粒进行转化。。。。。。。。。。。。。。。。。结果。。。。。无斑或只有几个斑。。。。。。。。。。。。。。

用JM110做也是一样的结果!

快崩溃了!转化没法做,实验就做不下去了!

请各位帮我分析一下原因吧,非常感谢!

发帖的时候忘了设置金币了,请版主帮下忙吧,帮我奖励一下,谢谢

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-2 at 15:15 ]
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figo.339

木虫 (著名写手)

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lwf991229(金币+2,VIP+0):感谢参与讨论,欢迎常来~ 2-17 12:29
我也碰到过这样的问题,做了一个月没有出来,后来换了个新的菌种就好了。估计是你的大肠杆菌有问题。
2楼2009-02-14 14:31:54
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36678293

铜虫 (正式写手)

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保存于-20度一个月左右后取出转接培养15个小时左右,然后转接培养2个半小时


最好是重新划线,在挑取单菌落接种,做感受态!
3楼2009-02-14 14:43:48
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

有区别吗?甘油保存的和重新划线的?
4楼2009-02-14 14:54:02
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zswx1

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lwf991229(金币+2,VIP+0):感谢参与讨论,欢迎常来~ 2-17 12:29
遇到过同样问题
是感受态的效率太低
不同人用同样方法做感受态结果会很不同
可以问别人要一管感受态做一下试验,就知道是哪的原因了
5楼2009-02-14 14:54:45
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zhhl2981

木虫 (职业作家)

严重同意楼上几位的意见
6楼2009-02-14 16:10:36
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

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于是将DH5a涂平板后调取单斑培养后将菌液保存于-20度一个月左右后取出转接培养15个小时左右,然后转接培养2个半小时,再用质粒进行转化

你是重新做了感受态还是拿感受态这么折腾……
这么折腾肯定就没有转化能力了……

感受态这东西用得少就跟公司买吧,便宜、效率高、不折腾
7楼2009-02-14 18:32:43
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

我是重新做的感受态,感受态其实也挺贵的,TAKARA的十次500元呢,别的公司不知道多少钱。
8楼2009-02-14 19:43:40
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郑B.CoA

金虫 (正式写手)

如果换了大肠杆菌重做不行的话还是买吧i
9楼2009-02-14 19:50:47
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jqq1985

银虫 (正式写手)

感受态的菌种能力退化,用最原始的菌种重新制作感受态。
10楼2009-02-14 20:19:36
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