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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

不知道怎样给金币,请版主帮帮忙吧
11楼2009-02-14 21:17:01
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

引用回帖:
Originally posted by guoqin_shiyin at 2009/2/14, 19:43:
我是重新做的感受态,感受态其实也挺贵的,TAKARA的十次500元呢,别的公司不知道多少钱。

也不是太离谱的价钱……
天根的价格是takara的1/2
所以我现在正式和takara的感受态告别了……
12楼2009-02-14 21:28:21
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

哦,不知道天根的效果怎么样?还有就是DH5a,TOP10,JM109等到底哪个用来做克隆最好啊?

都不知道买哪个
13楼2009-02-14 21:38:28
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

做普通克隆,转化效率高得离谱也没用
没有仔细比较过天根和takara的,反正天根是够我克隆基因的
据说TOP10比DH5a复制质粒的能力更强
DH5a比JM109能够吞进更大的质粒
JM109提质粒的时候比DH5a等麻烦些,因为某个基因不是缺陷型的,忘记哪个了,查查一些质粒抽提的说明书会提到,用JM系列的提质粒会多一步洗涤
14楼2009-02-14 21:56:50
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

像JM110这个菌株的话做感受态要注意什么吗?我做了好几次都没做出来
15楼2009-02-15 14:50:38
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mimisikai

金虫 (小有名气)

★ ★
lwf991229(金币+2,VIP+0):感谢参与讨论,欢迎常来~ 2-17 12:30
哎  你说的方法已经不能用作感受态了  
你遇到的就是感受态效率太低,只能重新做感受态
你所做的是在活化菌 而不是转换  感受态出了-80没多久就不具备转化能力了
16楼2009-02-15 22:42:22
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cauzhangtao

木虫 (正式写手)

★ ★
lwf991229(金币+2,VIP+0):感谢参与讨论,欢迎常来~ 2-17 12:30
感受态细胞很脆弱,所以制作的时候一定要小心,包括所用的枪头都要处理,把前面的尖削掉,以免对其造成损害。
17楼2009-02-16 09:07:18
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bobword

金虫 (小有名气)

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lwf991229(金币+2,VIP+0):感谢参与讨论,欢迎常来~ 2-17 12:30
这种事情遇到过,保存的感受态菌种不行了,去Takara买一管,回来自己划个线保存下菌种就可以了。其他细节不用怎么注意,和你以前一样做就行。祝实验顺利!
18楼2009-02-16 11:36:26
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qin68520

★ ★
lwf991229(金币+2,VIP+0):感谢参与讨论,欢迎常来~ 2-17 12:30
有没有试过重新做一次感受态,一般来说用新鲜的做效果比较好;另外,质粒的问题有没有排除?质粒的质量有没有保证?质粒与目的基因的连接效率问题?或者你还可以做个对照看看.......用的是哪一种质粒?不同的质粒适合在不一样的菌株中生长。
19楼2009-02-17 08:50:08
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

重新做感受态怎么做呢?
20楼2009-02-18 12:23:55
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