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wuchuqiu

铁虫 (小有名气)

★ ★
lwf991229(金币+2,VIP+0):感谢参与讨论,欢迎常来~ 2-19 12:51
建议你重新划平板复壮菌株,在挑取单菌落培养,用试剂公司的高效感受态细胞制备试剂盒制作,很便宜,一次可以做很多,我就是这么干的。
21楼2009-02-19 11:22:59
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fenghaizai

金虫 (小有名气)

自己做感受态,效果好又便宜,比买的好,买的在运输过程中的损失很大
22楼2009-02-19 11:33:03
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wordsworth3180

木虫 (正式写手)

换一只甘油管的菌株吧,重新做感受态!
23楼2009-02-19 15:26:49
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sunqx

木虫 (著名写手)

是不是感受态都冻死了?最后加甘油了吗
24楼2009-02-19 20:50:06
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hiking8715

金虫 (小有名气)

诸位师兄师姐做转化37培养的时候大约多长时间长菌啊,我的12小时了怎么啥都没有呢,还有以前的时候转化后只要二三十个克隆,哥哥姐姐们有知道的吗???
25楼2009-02-20 09:02:07
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guoqin_shiyin

银虫 (正式写手)

37度培养如果是克隆的话大概16个小时就可以看到菌了,12个小时可能能看到一点点或者看不到吧。
26楼2009-02-20 15:35:01
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holy518125

金虫 (小有名气)

个人认为解决的方案如下:
1.请确定是感受态出了问题,在其他方面没有问题,如转化的温度,个人就曾经犯过一直以为是细胞有问题了,最好发现是水浴锅的温度计坏了。
2.进行比较试验:使用别人的感受态是不是得到的相同的结果?如是,请从别的方面在入手分析;如不是可以认为是感受态的问题。
3.自己做感受态的时候是否操作规范。
27楼2009-02-22 18:46:28
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jjswlg

铜虫 (小有名气)

于是将DH5a涂平板后调取单斑培养后将菌液保存于-20度一个月左右后取出转接培养15个小时左右,然后转接培养2个半小时,再用质粒进行转化?

呵呵 是不是表达错了

应该是感受态的问题了
28楼2009-03-01 16:54:06
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ypt86

铁虫 (初入文坛)

质粒转进去了吗?
29楼2009-03-03 14:04:07
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bingdong05

银虫 (正式写手)

感觉是感受态的问题,以前遇到过同样的问题,当时快被搞死了,所有可能原因排除后,最后没办法又重新复壮的大肠杆菌,重新做的感受态,结果还可以。建议楼主复壮后重新做
30楼2009-03-03 15:24:42
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