24小时热门版块排行榜    

查看: 1189  |  回复: 4

Ivy_Yau

新虫 (初入文坛)

[交流] PCR反应条件的改进,求大牛 已有4人参与

如题,我在做两个种属的目的片段扩增,分别是大鼠和人的。
目的片段在最上面第一条marker的附近,大概2kb的大小
反应程序如下:
98度 10min
98度 30s
58or62度 30s
68度 1kb/min
30-35cycle
68度 10min

PCR用的是Takara的primerstar高保真酶

图一退火温度是62度,引物Tm69度左右
图二退火温度是58度,引物Tm64度左右
引物Tm值都是算上酶切位点的

觉得目的条带太暗了,特别是图片上左边的条带,胶回收后浓度只有20多ng/ul,有什么条件可以改进的吗?求建议!谢谢大家!

PCR反应条件的改进,求大牛


PCR反应条件的改进,求大牛-1

用的是cDNA做模板进行PCR扩增
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

最-难忘

木虫 (正式写手)

2楼2017-09-11 00:24:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

domopal

铁杆木虫 (正式写手)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
Tm值不能算上酶切位点

发自小木虫Android客户端
3楼2017-09-11 08:42:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yuanyuanlg01

铁虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
要进行尝试譬如做小量的温度梯度,看你的GC比例高的话加DMSO,或者切角回收做模版再次PCR等等。
4楼2017-09-11 11:07:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

781055707

木虫 (著名写手)

3楼正解。
采菊东篱下,悠然见南山。
5楼2017-09-11 11:29:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 Ivy_Yau 的主题更新
普通表情 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0854电子信息求调剂 +6 α____ 2026-03-22 7/350 2026-03-24 19:46 by sunjie8888
[考研] 调剂 +4 13853210211 2026-03-24 4/200 2026-03-24 19:44 by ms629
[考研] 一志愿吉大化学322求调剂 +4 17501029541 2026-03-23 6/300 2026-03-24 10:21 by 戴围脖的小蚊子
[考研] 一志愿哈工大,085400,320,求调剂 +3 gdlf9999 2026-03-24 3/150 2026-03-24 10:08 by 搏击518
[考博] 26申博自荐 +3 whh869393 2026-03-24 3/150 2026-03-24 09:55 by 21018060
[考研] 求调剂材料学硕080500,总分289分 5+3 @taotao 2026-03-19 21/1050 2026-03-23 10:17 by 冠c哥
[考研] 280分求调剂 一志愿085802 +4 PUMPT 2026-03-22 7/350 2026-03-22 22:13 by 星空星月
[考研] 一志愿华中农业071010,总分320求调剂 +5 困困困困坤坤 2026-03-20 6/300 2026-03-22 17:41 by hxsm
[考研] 一志愿中南化学(0703)总分337求调剂 +9 niko- 2026-03-19 10/500 2026-03-22 16:08 by ColorlessPI
[考研] 298求调剂一志愿211 +3 上岸6666@ 2026-03-20 3/150 2026-03-22 15:50 by ColorlessPI
[考研] 085600材料与化工306 +4 z1z2z3879 2026-03-21 4/200 2026-03-21 23:44 by ms629
[考研] 一志愿东华大学控制学硕320求调剂 +3 Grand777 2026-03-21 3/150 2026-03-21 19:23 by 简之-
[考研] 求调剂 +4 要好好无聊 2026-03-21 4/200 2026-03-21 18:57 by 学员8dgXkO
[考研] 一志愿重庆大学085700资源与环境总分308求调剂 +7 墨墨漠 2026-03-20 7/350 2026-03-21 16:36 by barlinike
[基金申请] 学校已经提交到NSFC,还能修改吗? 40+4 babangida 2026-03-19 9/450 2026-03-21 16:12 by babangida
[考研] 考研调剂求学校推荐 +3 伯乐29 2026-03-18 5/250 2026-03-20 22:59 by JourneyLucky
[考研] 材料学硕297已过四六级求调剂推荐 +11 adaie 2026-03-19 11/550 2026-03-20 21:30 by laoshidan
[考研] 261求B区调剂,科研经历丰富 +3 牛奶很忙 2026-03-20 4/200 2026-03-20 19:34 by JourneyLucky
[考研] 一志愿南理工085701环境302求调剂院校 +3 葵梓卫队 2026-03-20 3/150 2026-03-20 19:28 by zhukairuo
[考研] 收复试调剂生 +4 雨后秋荷 2026-03-18 4/200 2026-03-18 14:16 by elevennnne
信息提示
请填处理意见