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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 做WB时actin总不出，有时候需要孵育两遍，目的蛋白也是，怎么解决
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我在你在

木虫 (初入文坛)

[求助] 做WB时actin总不出，有时候需要孵育两遍，目的蛋白也是，怎么解决 已有5人参与

做western时，内参actin经常性不出，改变抗体浓度也试过 ，依旧不出，目的蛋白出的也不好，不知道什么原因，经常需要孵育两遍，最近一次做孵育两遍依旧无actin，崩溃中，还有做wb前要测蛋白浓度么 ，蛋白浓度范围在多少才合适，我之前测在30ug/ml左右，应该不低吧。求大神指教。
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1楼 2017-09-10 10:35:52
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我在你在

木虫 (初入文坛)
急急急，谢谢
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2楼2017-09-10 10:38:20
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314300420

捐助贵宾 (著名写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-09-11 08:03:49
需要测蛋白浓度，30ug/ml的浓度太低了，上样量每孔需要10ug以上，所以样品浓度起码得0.5mg/ml以上了

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3楼2017-09-10 11:36:24
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fireme33

至尊木虫 (知名作家)

搬砖娃娃
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-09-11 08:04:01
上样量增加一倍 actin浓度上调    抗体是国外的么  把批号以及包装信息写邮件发过去 也有可能是国内小作坊套牌假抗体

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哭着哭着就笑了
4楼2017-09-10 11:40:13
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我在你在

木虫 (初入文坛)
上样量20ul，抗体都是进口的   ab的
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5楼2017-09-10 12:12:57
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我在你在

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 314300420 at 2017-09-10 11:36:24
需要测蛋白浓度，30ug/ml的浓度太低了，上样量每孔需要10ug以上，所以样品浓度起码得0.5mg/ml以上了

我怎么觉得不太对呢 ，我一个细胞瓶加300ul裂解液，浓度应该挺高的了
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6楼2017-09-10 12:16:33
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fireme33

至尊木虫 (知名作家)

搬砖娃娃

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
引用回帖:
5楼: Originally posted by 我在你在 at 2017-09-10 05:12:57
上样量20ul，抗体都是进口的   ab的

ab很多假的 建议先核实 为啥不cst 1比2000 价格不算贵

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哭着哭着就笑了
7楼2017-09-11 08:07:22
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chaosyw

铁杆木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
担心抗体质量的话可以上www.labome.com用抗原蛋白名称或是货号查下相应抗体的sci报道情况，尽量选那些报道比较多的.
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8楼2017-09-11 08:35:36
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梦幻舞者

铜虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
蛋白浓度低，其他应该没问题
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9楼2017-09-11 11:48:20
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青春过期咯

铁虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

蛋白浓度太低，一般来说总蛋白上样量应该在20ug-50ug  特殊指标可以相应调整，你上样量太低了
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从前不回头，往后不将就
10楼2017-10-14 16:57:02
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