应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 做WB时actin总不出，有时候需要孵育两遍，目的蛋白也是，怎么解决
51/1返回列表
查看: 2286  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

我在你在

木虫 (初入文坛)

[求助] 做WB时actin总不出，有时候需要孵育两遍，目的蛋白也是，怎么解决 已有5人参与

做western时，内参actin经常性不出，改变抗体浓度也试过 ，依旧不出，目的蛋白出的也不好，不知道什么原因，经常需要孵育两遍，最近一次做孵育两遍依旧无actin，崩溃中，还有做wb前要测蛋白浓度么 ，蛋白浓度范围在多少才合适，我之前测在30ug/ml左右，应该不低吧。求大神指教。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-09-10 10:35:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

314300420

捐助贵宾 (著名写手)
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-09-11 08:03:49
需要测蛋白浓度，30ug/ml的浓度太低了，上样量每孔需要10ug以上，所以样品浓度起码得0.5mg/ml以上了

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
3楼2017-09-10 11:36:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答

fireme33

至尊木虫 (知名作家)

搬砖娃娃
★
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-09-11 08:04:01
上样量增加一倍 actin浓度上调    抗体是国外的么  把批号以及包装信息写邮件发过去 也有可能是国内小作坊套牌假抗体

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
哭着哭着就笑了
4楼2017-09-10 11:40:13
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我在你在

木虫 (初入文坛)
上样量20ul，抗体都是进口的   ab的
赞一下 回复此楼
5楼2017-09-10 12:12:57
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

我在你在

木虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 314300420 at 2017-09-10 11:36:24
需要测蛋白浓度，30ug/ml的浓度太低了，上样量每孔需要10ug以上，所以样品浓度起码得0.5mg/ml以上了

我怎么觉得不太对呢 ，我一个细胞瓶加300ul裂解液，浓度应该挺高的了
赞一下 回复此楼
6楼2017-09-10 12:16:33
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 11 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 极限拉扯，如何抉择 +11 Isak0320 2026-10-12 15/750 2026-10-14 21:55 by 猫鱼不是鱼
[基金申请] 申请科研项目纯靠实力能成功吗？ 200+5 David1982 2026-10-13 8/400 2026-10-14 21:38 by lhw_GPA4.0
[职场人生] 40+中年人失业后，还能找到好工作吗？ +3 xqy2009 2026-10-13 3/150 2026-10-14 20:17 by 43358052
[论文投稿] 二审4个多月了还是Awaiting Reviewer Scores 10+3 纳斯达克ML 2026-10-11 4/200 2026-10-14 17:30 by babero
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +8 wangyl_123 2026-10-10 13/650 2026-10-14 15:12 by zuesli
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +4 好运来～9527 2026-10-10 7/350 2026-10-13 08:41 by xli1984
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:06 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:54 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 各位大佬，路线设计求助 +6 zapen 2026-10-08 8/400 2026-10-10 15:59 by zapen
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些？ +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭