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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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hdhgls

金虫 (正式写手)

[求助] 剪切掉目的基因后重组empty vector

各位分子生物学大神,我最近在做一个自己很不擅长的实验,我购买了一个载有我的目的基因的vector,现在想剪掉我的目的基因然后组合一个empty vector (做control用的),现在已经剪切好了(剪切位点是salI和HindIII),但是因为两个端位不兼合,请问有没有建议解决办法的? 谢谢!
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hdhgls

金虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by aishida at 2017-09-06 18:39:07
用高保真酶的目的产生是平末端的连接,高保真酶具有外切酶活性能把末端切平,T4具有末端转移酶活性,会在平末端3'端加碱基A,可能会连不上
...

再请教一下,我得到了几个colonies,但是不确定这是剪掉目的基因的,还是非特异的污染产生的,可以通过什么方法确定是empty vector, 它还可被同样的那两个限制酶剪切吗?谢谢

发自小木虫IOS客户端
16楼2017-09-10 20:17:50
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aishida

禁虫 (职业作家)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-09-06 07:40:11
本帖内容被屏蔽

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

2楼2017-09-06 06:22:48
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hdhgls

金虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by aishida at 2017-09-06 06:22:48
加聚合酶补平末端,再用连接酶连接就行

聚合时需要嘌呤碱啥的不,你有具体点的protocol吗?我们实验室有T4聚合酶还有连接酶biolab的。

发自小木虫IOS客户端
3楼2017-09-06 06:51:09
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aishida

禁虫 (职业作家)

本帖内容被屏蔽

4楼2017-09-06 07:10:16
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