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hdhgls

金虫 (正式写手)

[求助] 剪切掉目的基因后重组empty vector

各位分子生物学大神,我最近在做一个自己很不擅长的实验,我购买了一个载有我的目的基因的vector,现在想剪掉我的目的基因然后组合一个empty vector (做control用的),现在已经剪切好了(剪切位点是salI和HindIII),但是因为两个端位不兼合,请问有没有建议解决办法的? 谢谢!
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aishida

禁虫 (职业作家)


西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-09-06 07:40:11
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2楼2017-09-06 06:22:48
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hdhgls

金虫 (正式写手)

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引用回帖:
2楼: Originally posted by aishida at 2017-09-06 06:22:48
加聚合酶补平末端,再用连接酶连接就行

聚合时需要嘌呤碱啥的不,你有具体点的protocol吗?我们实验室有T4聚合酶还有连接酶biolab的。

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3楼2017-09-06 06:51:09
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aishida

禁虫 (职业作家)

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4楼2017-09-06 07:10:16
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aishida

禁虫 (职业作家)

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5楼2017-09-06 07:10:52
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aishida

禁虫 (职业作家)

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6楼2017-09-06 07:12:13
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hdhgls

金虫 (正式写手)

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引用回帖:
6楼: Originally posted by aishida at 2017-09-06 07:12:13
t4不行,要用高保真酶,不然3端有a连不上
...

再送你朵花。不需要引物挺好,原来pcr还可以不要引物的。你有什么建议聚合酶吗?我这边半夜了,明天看到再回复你哈

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7楼2017-09-06 07:18:29
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aishida

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8楼2017-09-06 07:23:46
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hdhgls

金虫 (正式写手)

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引用回帖:
8楼: Originally posted by aishida at 2017-09-06 07:23:46
pfu,phusion,kod等都行
...

为什么要用高保真聚合酶?

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9楼2017-09-06 18:03:02
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hdhgls

金虫 (正式写手)

引用回帖:
6楼: Originally posted by aishida at 2017-09-06 07:12:13
t4不行,要用高保真酶,不然3端有a连不上
...

有人说这样可以
剪切掉目的基因后重组empty vector



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10楼2017-09-06 18:18:26
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