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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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aishida

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11楼2017-09-06 18:39:07
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aishida

禁虫 (职业作家)

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12楼2017-09-06 18:42:55
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hdhgls

金虫 (正式写手)

送红花一朵
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12楼: Originally posted by aishida at 2017-09-06 18:42:55
你可以用他的方法试试呗,行的话就不用麻烦了
...

谢谢。有问题再请教。

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13楼2017-09-06 20:59:37
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aishida

禁虫 (职业作家)

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14楼2017-09-06 21:54:46
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hdhgls

金虫 (正式写手)

引用回帖:
14楼: Originally posted by aishida at 2017-09-06 21:54:46
不好意思,前面说错了。早晨的时候把taq酶当成t4了所以才说t4不行,后来反应过来了t4具有核酸外切酶活性,可以用于补平末端
...

好的,我用T4先试试,因为实验室T4的聚合酶和连接酶都有。谢谢。
15楼2017-09-07 06:02:22
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hdhgls

金虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by aishida at 2017-09-06 18:39:07
用高保真酶的目的产生是平末端的连接,高保真酶具有外切酶活性能把末端切平,T4具有末端转移酶活性,会在平末端3'端加碱基A,可能会连不上
...

再请教一下,我得到了几个colonies,但是不确定这是剪掉目的基因的,还是非特异的污染产生的,可以通过什么方法确定是empty vector, 它还可被同样的那两个限制酶剪切吗?谢谢

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16楼2017-09-10 20:17:50
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aishida

禁虫 (职业作家)

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17楼2017-09-10 22:19:10
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hdhgls

金虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
17楼: Originally posted by aishida at 2017-09-10 22:19:10
一般是不能再被那两个酶酶切的。你可以选择那个载体中的一个酶切位点,最好不要用前面的两个酶切位点(看质粒图谱上的MCS)把质粒切开,观察条带大小就行了
...

估计那些个colonies是不知怎么污染导致的 因为在选择培养基中没有生长。我估计需要再连接一次试试

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18楼2017-09-11 00:08:25
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aishida

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19楼2017-09-11 14:12:54
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hdhgls

金虫 (正式写手)

送红花一朵
引用回帖:
19楼: Originally posted by aishida at 2017-09-11 14:12:54
还有一种方法,拿你的载体的通用引物来pcr,根据条带大小来判断是否是空载体
...

第一个方法可能好些,我没有这个载体的引物,而且闭合载体的条带大小不一定是其真实大小。我现在考虑的是怎么做empty载体,因为目的基因是从sal1和hind111切点嵌入的,我上次还是从这两个位点剪切,不知道对吗,或许应该从其他两个位点。

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20楼2017-09-11 16:18:05
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