应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 剪切掉目的基因后重组empty vector
212/3返回列表上一页123下一页
查看: 1874  |  回复: 20
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

aishida

禁虫 (职业作家)
本帖内容被屏蔽

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

hdhgls
11楼2017-09-06 18:39:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aishida

禁虫 (职业作家)
本帖内容被屏蔽

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

hdhgls
12楼2017-09-06 18:42:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hdhgls

金虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
12楼: Originally posted by aishida at 2017-09-06 18:42:55
你可以用他的方法试试呗，行的话就不用麻烦了
...

谢谢。有问题再请教。

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
13楼2017-09-06 20:59:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aishida

禁虫 (职业作家)
本帖内容被屏蔽
14楼2017-09-06 21:54:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hdhgls

金虫 (正式写手)
引用回帖:
14楼: Originally posted by aishida at 2017-09-06 21:54:46
不好意思，前面说错了。早晨的时候把taq酶当成t4了所以才说t4不行，后来反应过来了t4具有核酸外切酶活性，可以用于补平末端
...

好的，我用T4先试试，因为实验室T4的聚合酶和连接酶都有。谢谢。
赞一下 回复此楼
15楼2017-09-07 06:02:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hdhgls

金虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
11楼: Originally posted by aishida at 2017-09-06 18:39:07
用高保真酶的目的产生是平末端的连接，高保真酶具有外切酶活性能把末端切平，T4具有末端转移酶活性，会在平末端3'端加碱基A，可能会连不上
...

再请教一下，我得到了几个colonies,但是不确定这是剪掉目的基因的，还是非特异的污染产生的，可以通过什么方法确定是empty vector, 它还可被同样的那两个限制酶剪切吗？谢谢

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
16楼2017-09-10 20:17:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aishida

禁虫 (职业作家)
本帖内容被屏蔽

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

hdhgls
17楼2017-09-10 22:19:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hdhgls

金虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
17楼: Originally posted by aishida at 2017-09-10 22:19:10
一般是不能再被那两个酶酶切的。你可以选择那个载体中的一个酶切位点，最好不要用前面的两个酶切位点（看质粒图谱上的MCS）把质粒切开，观察条带大小就行了
...

估计那些个colonies是不知怎么污染导致的 因为在选择培养基中没有生长。我估计需要再连接一次试试

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
18楼2017-09-11 00:08:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

aishida

禁虫 (职业作家)
本帖内容被屏蔽

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

hdhgls
19楼2017-09-11 14:12:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hdhgls

金虫 (正式写手)
送红花一朵
引用回帖:
19楼: Originally posted by aishida at 2017-09-11 14:12:54
还有一种方法，拿你的载体的通用引物来pcr，根据条带大小来判断是否是空载体
...

第一个方法可能好些，我没有这个载体的引物，而且闭合载体的条带大小不一定是其真实大小。我现在考虑的是怎么做empty载体，因为目的基因是从sal1和hind111切点嵌入的，我上次还是从这两个位点剪切，不知道对吗，或许应该从其他两个位点。

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
20楼2017-09-11 16:18:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 hdhgls 的主题更新
212/3返回列表上一页123下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 YXM1FDCSE8Bn 2026-11-01 6/300 2026-11-02 10:02 by dcc2yOIRGGTT
[找工作] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 YXM1FDCSE8Bn 2026-10-31 5/250 2026-11-02 09:42 by dcc2yOIRGGTT
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 7/350 2026-11-02 06:29 by xzcv0Tehd8lQ
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 6/300 2026-11-02 06:20 by xzcv0Tehd8lQ
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 9/450 2026-11-02 06:13 by xzcv0Tehd8lQ
[考研] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 13/650 2026-11-02 06:03 by xzcv0Tehd8lQ
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 xvJS1BYDxvBS 2026-10-31 10/500 2026-11-02 06:00 by xzcv0Tehd8lQ
[论文投稿] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 14/700 2026-11-02 05:41 by xzcv0Tehd8lQ
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 21/1050 2026-11-02 05:41 by xzcv0Tehd8lQ
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +5 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 18/900 2026-11-02 05:34 by xzcv0Tehd8lQ
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 17/850 2026-11-02 05:34 by xzcv0Tehd8lQ
[论文投稿] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +6 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 27/1350 2026-11-02 05:28 by xzcv0Tehd8lQ
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +4 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 9/450 2026-11-02 03:26 by xzcv0Tehd8lQ
[硕博家园] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 16/800 2026-11-02 02:47 by xzcv0Tehd8lQ
[考博] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 hKe7U1kad5Sg 2026-10-31 6/300 2026-11-01 22:11 by xzcv0Tehd8lQ
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 13/650 2026-11-01 16:48 by BCdvBAEpt3zm
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +5 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 22/1100 2026-11-01 16:35 by BCdvBAEpt3zm
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 1uaZt2kAZj2S 2026-10-31 8/400 2026-11-01 14:48 by BCdvBAEpt3zm
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 1uaZt2kAZj2S 2026-10-30 16/800 2026-11-01 12:14 by BCdvBAEpt3zm
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 X5bHxOULxFqb 2026-10-30 18/900 2026-11-01 12:11 by BCdvBAEpt3zm
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭