应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 测定酶活力的时候感觉酶总是没有和底物反应
51/1返回列表
查看: 1370  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

max小线

新虫 (初入文坛)

[求助] 测定酶活力的时候感觉酶总是没有和底物反应 已有2人参与

各位大神，最近做了一个月的酶活力测定，始终没有结果，想请教一下是不是哪个操作出了问题
反应体系如下：
ddH2O 300ul
17mM MgCl2 300ul
Tirs-HCL 200ul
100mM ATP 50ul
3mM COA 100ul
20mM 对-香豆酸 10ul
酶 40ul
MgCl2、Tirs、ATP、COA均用超纯水配制，对-香豆酸用2ml乙醇溶解后超纯水定容至25ml
MgCl2、Tirs、对-香豆酸、ATP溶液保存在4℃，COA溶液分装后保存在-20℃。
ATP粉末保存在4℃，COA粉末保存在-20℃。
反应温度为室温(25-28℃),反应时间为20min。
酶为重组蛋白，经纯化后马上进行活力测定，测动力学20min内吸光度几乎没有改变，反应完上液相检测也没有底物的峰。
我是真的快绝望了，希望大神能给一点帮助，感激不尽
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-09-05 17:35:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jhoo

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

最好用粗酶液测定酶活力，由于酶具有专一性一般影响不大，对照的样品加钝化或灭活的酶，我觉得酶在纯化时可能温度，盐浓度，pH等几方面影响较大，你最好用粗酶进行性质研究一下，然后再进行纯化，粗酶能够测定活性，你那个纯化可能有问题，最好再找个有活力的粗酶做阳性对照，这样可以排除你的试剂和方法是否有问题，我觉得是你没有阳性对照（通常是采用同样方法可以测定的酶作为阳性对照），
赞一下 回复此楼
7楼2018-05-18 20:33:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答

黄文元1

新虫 (小有名气)
测20min太长了吧，可能是20min时间太长，以至于数值看起来不明显

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
2楼2017-09-05 17:54:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

max小线

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 黄文元1 at 2017-09-05 17:54:55
测20min太长了吧，可能是20min时间太长，以至于数值看起来不明显

反应20min后跟0min的吸光度差不多

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
3楼2017-09-05 18:06:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangmeng0711

新虫 (小有名气)
没有酶呗

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
4楼2017-09-05 21:09:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 7 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +22 Lanmanbaby 2026-08-09 36/1800 2026-08-12 22:50 by sdfapple719
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +10 Tide man 2026-08-11 10/500 2026-08-12 20:59 by 陈晨晨陈啊
[基金申请] FileCode能看出啥？ +8 要乐观耀哥 2026-08-10 21/1050 2026-08-12 16:08 by 云上清扬
[基金申请] filecode +13 documentary 2026-08-10 15/750 2026-08-12 15:56 by 云上清扬
[基金申请] 是这周出结果还是下周出结果？ +3 yuleib84 2026-08-11 3/150 2026-08-11 21:53 by jnhyjjm
[基金申请] 小木虫上这么多卖论文的，真有人买论文么？感觉没必要啊 +8 Tide man 2026-08-10 9/450 2026-08-11 20:39 by beefly
[硕博家园] 读博的好处 +3 lnee 2026-08-11 3/150 2026-08-11 18:10 by 希望我好好的
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
[基金申请] 2026国自然放榜时间 +9 布布和一二 2026-08-08 9/450 2026-08-10 11:22 by xxxx2020
[基金申请] 这样的filecode谁见过 +11 布布和一二 2026-08-08 22/1100 2026-08-10 11:10 by wmfsnow
[基金申请] 面上项目filecode邪修 +5 西山十月 2026-08-09 7/350 2026-08-10 07:32 by 仁砚薪传
[基金申请] filecode与中标关系的预测 +5 布布和一二 2026-08-07 5/250 2026-08-09 16:15 by 袁向阳007
[基金申请] 关于filecode，很负责任的告诉大家 +6 爱看书的可乐 2026-08-08 7/350 2026-08-08 22:13 by a_niu
[基金申请] 关于豆爷回答的JTJC与%2F数量 +5 yang182083 2026-08-06 7/350 2026-08-08 18:29 by zhanghaozhu
[基金申请] 国基金的申报应该改成非等额制，评价高的钱多评价低的钱少，但是增加资助率 +7 a089 2026-08-07 7/350 2026-08-08 18:05 by gltch
[基金申请] 化学口download_prp&fileCode的固定段好像这几天一直没变，有变的大神么？ +3 Tide man 2026-08-07 4/200 2026-08-07 22:39 by Tide man
[基金申请] 固定端突然变了，今天 +6 archvillain 2026-08-06 10/500 2026-08-07 16:03 by 医学老男孩
[基金申请] filecode变化情况 +6 布布和一二 2026-08-07 22/1100 2026-08-07 14:45 by 且听虎啸
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭