应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 生物化学 » 测定酶活力的时候感觉酶总是没有和底物反应
71/1返回列表
查看: 1459  |  回复: 6
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

max小线

新虫 (初入文坛)

[求助] 测定酶活力的时候感觉酶总是没有和底物反应 已有2人参与

各位大神，最近做了一个月的酶活力测定，始终没有结果，想请教一下是不是哪个操作出了问题
反应体系如下：
ddH2O 300ul
17mM MgCl2 300ul
Tirs-HCL 200ul
100mM ATP 50ul
3mM COA 100ul
20mM 对-香豆酸 10ul
酶 40ul
MgCl2、Tirs、ATP、COA均用超纯水配制，对-香豆酸用2ml乙醇溶解后超纯水定容至25ml
MgCl2、Tirs、对-香豆酸、ATP溶液保存在4℃，COA溶液分装后保存在-20℃。
ATP粉末保存在4℃，COA粉末保存在-20℃。
反应温度为室温(25-28℃),反应时间为20min。
酶为重组蛋白，经纯化后马上进行活力测定，测动力学20min内吸光度几乎没有改变，反应完上液相检测也没有底物的峰。
我是真的快绝望了，希望大神能给一点帮助，感激不尽
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼 2017-09-05 17:35:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

黄文元1

新虫 (小有名气)
测20min太长了吧，可能是20min时间太长，以至于数值看起来不明显

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
2楼2017-09-05 17:54:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

max小线

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 黄文元1 at 2017-09-05 17:54:55
测20min太长了吧，可能是20min时间太长，以至于数值看起来不明显

反应20min后跟0min的吸光度差不多

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
3楼2017-09-05 18:06:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yangmeng0711

新虫 (小有名气)
没有酶呗

发自小木虫IOS客户端
回复此楼
4楼2017-09-05 21:09:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

max小线

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by yangmeng0711 at 2017-09-05 21:09:23
没有酶呗

考马斯亮蓝g-250测定过酶浓度 1.7mg/ml

发自小木虫IOS客户端
赞一下 回复此楼
5楼2017-09-05 21:46:40
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

小郑555

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by max小线 at 2017-09-05 18:06:53
反应20min后跟0min的吸光度差不多
...

1.buffer PH不合适
2.反应时间可以在加长，HPLC检测有无产物
3.你确定你的酶有活性？都没有产物峰，就测动力学
4.测动力学就取初速度，测1-2min就可以了
赞一下 回复此楼
6楼2018-03-20 12:07:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jhoo

至尊木虫 (知名作家)

【答案】应助回帖

最好用粗酶液测定酶活力，由于酶具有专一性一般影响不大，对照的样品加钝化或灭活的酶，我觉得酶在纯化时可能温度，盐浓度，pH等几方面影响较大，你最好用粗酶进行性质研究一下，然后再进行纯化，粗酶能够测定活性，你那个纯化可能有问题，最好再找个有活力的粗酶做阳性对照，这样可以排除你的试剂和方法是否有问题，我觉得是你没有阳性对照（通常是采用同样方法可以测定的酶作为阳性对照），
赞一下 回复此楼
7楼2018-05-18 20:33:12
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 max小线 的主题更新
71/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[硕博家园] 极限拉扯，如何抉择 +11 Isak0320 2026-10-12 15/750 2026-10-14 21:55 by 猫鱼不是鱼
[基金申请] 申请科研项目纯靠实力能成功吗？ 200+5 David1982 2026-10-13 8/400 2026-10-14 21:38 by lhw_GPA4.0
[职场人生] 40+中年人失业后，还能找到好工作吗？ +3 xqy2009 2026-10-13 3/150 2026-10-14 20:17 by 43358052
[论文投稿] 二审4个多月了还是Awaiting Reviewer Scores 10+3 纳斯达克ML 2026-10-11 4/200 2026-10-14 17:30 by babero
[有机交流] OpenAI又攻克数学难题了，离AI做有机合成还有多远？ +8 wangyl_123 2026-10-10 13/650 2026-10-14 15:12 by zuesli
[教师之家] 课题组会帮你通过考核么？ +4 好运来～9527 2026-10-10 7/350 2026-10-13 08:41 by xli1984
[基金申请] 入职后第一次管课题组的专利缴费，对账才发现官费比别人多掏了一倍 +6 13108017953 2026-10-08 6/300 2026-10-12 20:07 by w3w3y3
[公派出国] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:34 by XQNyDCa1Tk5n
[公派出国] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 22:26 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 9/450 2026-10-11 22:15 by XQNyDCa1Tk5n
[考博] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 22:11 by XQNyDCa1Tk5n
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 (EPI+-1)(金币-50) +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 10/500 2026-10-11 14:25 by VOMexwnDzOFZ
[教师之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 (EPI+-1)(金币-50) +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 14:05 by VOMexwnDzOFZ
[考研] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:51 by VOMexwnDzOFZ
[硕博家园] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 8/400 2026-10-11 13:45 by VOMexwnDzOFZ
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 7/350 2026-10-11 10:34 by VOMexwnDzOFZ
[考博] 招收博士生一名 +3 mandolin 2026-10-10 3/150 2026-10-11 10:21 by 不是山谷！
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +4 qR2AdCWTVtkw 2026-10-09 4/200 2026-10-11 03:14 by M0zrYVSAnxpE
[有机交流] 我应该选哪条合成路线让实验成功率高一些？ +5 jing816y 2026-10-08 9/450 2026-10-10 09:05 by zapen
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭