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测定酶活力的时候感觉酶总是没有和底物反应已有2人参与
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各位大神，最近做了一个月的酶活力测定，始终没有结果，想请教一下是不是哪个操作出了问题 反应体系如下： ddH2O 300ul 17mM MgCl2 300ul Tirs-HCL 200ul 100mM ATP 50ul 3mM COA 100ul 20mM 对-香豆酸 10ul 酶 40ul MgCl2、Tirs、ATP、COA均用超纯水配制，对-香豆酸用2ml乙醇溶解后超纯水定容至25ml MgCl2、Tirs、对-香豆酸、ATP溶液保存在4℃，COA溶液分装后保存在-20℃。 ATP粉末保存在4℃，COA粉末保存在-20℃。 反应温度为室温(25-28℃),反应时间为20min。 酶为重组蛋白，经纯化后马上进行活力测定，测动力学20min内吸光度几乎没有改变，反应完上液相检测也没有底物的峰。 我是真的快绝望了，希望大神能给一点帮助，感激不尽  |
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