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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » [求助]PCR之后电泳，胶上空白
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windymoon6355

[交流] [求助]PCR之后电泳，胶上空白

大家好……
我现在在做PCR相关的内容，但是大多数的模板无论如何都跑不出结果（琼脂糖电泳后，胶上完全是空白），各种Mg2+浓度和退火温度都试过
一个奇怪的问题就是在另外的实验室请他们帮忙做梯度（我们这里做不了梯度PCR），各种退火温度和体系 最后电泳都能跑出条带，只是明亮度不同而已
回到自己这边就无论如何都做不出来~（但是不是全部，有少量的模板几乎每次pcr都能成功）

相关的内容：pcr仪不知道是什么牌子，是那种很小的，25*0.2ml，前面板是一个倾斜度很大的斜面
酶有 鼎国/博士德/Fermentas，都试过，在自己这里都跑不出结果
需要扩增的内容有100+bp的，也有600bp左右的，几乎每次都能扩出来的是全长……
引物应该没有问题，在别的实验室都可以做出来

大概情况就是这样，哪位熟悉这方面的师兄师姐能帮我看看？
感激不尽！！

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-19 at 12:40 ]
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1楼 2009-02-12 20:07:43
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)
难道PCR仪挂了？你试过用这个PCR扩出东西来没？
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2楼2009-02-12 20:11:58
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windymoon6355

扩出来过的
全长都能扩出来，但是里面的片段好多都扩不出来
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3楼2009-02-12 21:31:27
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bbyu007

木虫 (正式写手)
PCR是伪科学，别能作梯度能出来的话，就拿去让别人帮你做吧，哪怕花点钱呢，PCR这东西不够那闹心的，反正又不差钱~~~~~
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我是笨笨鱼~~~
4楼2009-02-12 21:49:55
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shadowfly

木虫 (小有名气)
同样的样本，同时做四份，分别在两边的仪器上各做两个，再对比，如果还是有问题，就有可能是PCR仪器的问题，找仪器厂家调校一下吧
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5楼2009-02-13 00:18:55
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咖啡杯

金虫 (小有名气)

应该是 仪器的问题

应该是 仪器的问题
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6楼2009-02-13 14:15:50
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niure

禁虫 (知名作家)
本帖内容被屏蔽
7楼2009-02-13 14:36:29
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fraser

银虫 (正式写手)
可能是仪器的退火温度不准，我实验室的PCR仪有一台检修的时候差了 8度，呵呵。
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8楼2009-02-13 16:44:09
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livacin

铁虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
相同的问题我也遇见了 我用的百泰克的那个green什么的的那个染料 那个要是pcr反应液中含有双链DNA的话加入染料会变绿。我加入染料之后pcr反应液也会变绿 但是电泳出来之后 就胶上都是空白了 只有maker了 很奇怪
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9楼2010-01-13 20:07:30
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