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windymoon6355

[交流] [求助]PCR之后电泳,胶上空白

大家好……
我现在在做PCR相关的内容,但是大多数的模板无论如何都跑不出结果(琼脂糖电泳后,胶上完全是空白),各种Mg2+浓度和退火温度都试过
一个奇怪的问题就是在另外的实验室请他们帮忙做梯度(我们这里做不了梯度PCR),各种退火温度和体系 最后电泳都能跑出条带,只是明亮度不同而已
回到自己这边就无论如何都做不出来~(但是不是全部,有少量的模板几乎每次pcr都能成功)

相关的内容:pcr仪不知道是什么牌子,是那种很小的,25*0.2ml,前面板是一个倾斜度很大的斜面
酶有 鼎国/博士德/Fermentas,都试过,在自己这里都跑不出结果
需要扩增的内容有100+bp的,也有600bp左右的,几乎每次都能扩出来的是全长……
引物应该没有问题,在别的实验室都可以做出来

大概情况就是这样,哪位熟悉这方面的师兄师姐能帮我看看?
感激不尽!!

[ Last edited by 350784478 on 2009-10-19 at 12:40 ]
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三磷酸腺苷

铁杆木虫 (职业作家)

难道PCR仪挂了?你试过用这个PCR扩出东西来没?
2楼2009-02-12 20:11:58
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windymoon6355

扩出来过的
全长都能扩出来,但是里面的片段好多都扩不出来
3楼2009-02-12 21:31:27
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bbyu007

木虫 (正式写手)

PCR是伪科学,别能作梯度能出来的话,就拿去让别人帮你做吧,哪怕花点钱呢,PCR这东西不够那闹心的,反正又不差钱~~~~~
我是笨笨鱼~~~
4楼2009-02-12 21:49:55
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shadowfly

木虫 (小有名气)

同样的样本,同时做四份,分别在两边的仪器上各做两个,再对比,如果还是有问题,就有可能是PCR仪器的问题,找仪器厂家调校一下吧
5楼2009-02-13 00:18:55
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咖啡杯

金虫 (小有名气)

应该是 仪器的问题

应该是 仪器的问题
6楼2009-02-13 14:15:50
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niure

禁虫 (知名作家)

本帖内容被屏蔽

7楼2009-02-13 14:36:29
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fraser

银虫 (正式写手)

可能是仪器的退火温度不准,我实验室的PCR仪有一台检修的时候差了 8度,呵呵。
8楼2009-02-13 16:44:09
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livacin

铁虫 (正式写手)


小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖交流
相同的问题我也遇见了 我用的百泰克的那个green什么的的那个染料 那个要是pcr反应液中含有双链DNA的话加入染料会变绿。我加入染料之后pcr反应液也会变绿 但是电泳出来之后 就胶上都是空白了 只有maker了 很奇怪
9楼2010-01-13 20:07:30
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