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zht930528

木虫 (正式写手)

麻辣王子

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[求助] 双荧光素酶报告实验，24孔板，质粒比例及总量，还有miRNA类似物共转染等问题已有3人参与

楼主小白一枚，在做双荧光素酶报告实验。

一：肺癌细胞292，铺的24孔板，铺板前没计数，隔天镜检，细胞密度有点低，应该不到90%左右，可以再等一天转染不？

二：实验载体与海肾荧光素载体的比例多少合适呢？另外miRNA类似物加多少量？

三：DNA的总量是加上miRNA类似物的嘛？

四：DNA总量与lipo2000的比例？

五：铺板用的培养基是含有抗生素的，转染前PBS清洗，这个影响大不大？转染前需要不需要细胞饥饿处理？

六：24孔板无血清无抗培养基500 uL ＋稀释质粒与稀释lipo2000的体积，终体积有多少？

问题比较多，请诸位做过的大神予以指点。

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麻辣王子不爱做实验

1楼 2017-08-30 13:50:16

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zht930528

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麻辣王子

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引用回帖:

5楼: Originally posted by 那片海dm at 2017-08-30 15:22:28
之前我铺的细胞如果24h没长满师姐都让我重新铺，而且我们铺板都是没加抗生素的，也不知道加了之后用PBS洗会不会有影响...

抗生素对细胞影响很大，铺板密度依据不同细胞种类与实验目的可以自由调整，不过细胞密一点可以抵抗转染试剂的毒性；由于实验室条件有限，为了防止染菌，采用了添加双抗，不过转染前用无抗无血清培养基润洗一遍，转染时采用无抗无血清培养基培养，转染效率也是还可以的；转染后如果有换液的步骤的话，一定要换无抗的培养基。个人实验过程中的一点见解。