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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 双荧光素酶报告实验，24孔板，质粒比例及总量，还有miRNA类似物共转染等问题
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zht930528

木虫 (正式写手)

麻辣王子

[求助] 双荧光素酶报告实验，24孔板，质粒比例及总量，还有miRNA类似物共转染等问题 已有3人参与

楼主小白一枚，在做双荧光素酶报告实验。

一： 肺癌细胞292，铺的24孔板，铺板前没计数，隔天镜检，细胞密度有点低，应该不到90%左右，可以再等一天转染不？


二：实验载体与海肾荧光素载体的比例多少合适呢？另外miRNA类似物加多少量？   


三：DNA的总量是加上miRNA类似物的嘛？


四：DNA总量与lipo2000的比例？


五：铺板用的培养基是含有抗生素的，转染前PBS清洗，这个影响大不大？ 转染前需要不需要细胞饥饿处理？


六：24孔板无血清无抗培养基500 uL ＋ 稀释质粒与稀释lipo2000的体积，终体积有多少？


问题比较多，请诸位做过的大神予以指点。
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麻辣王子不爱做实验
1楼 2017-08-30 13:50:16
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那片海dm

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zht930528: 金币+10, ★★★很有帮助 2017-08-30 15:12:13
一般都是铺板24h之内转染，时间长了不好转，DNA和Lip2000的比例Lip2000说明书上有，不同厂家的应该不一样，铺板时不要加抗生素会影响转染效率的
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3楼2017-08-30 14:59:18
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zht930528

木虫 (正式写手)

麻辣王子
查了好多资料，也没搞太清楚明白。百度文库中相关知识的就不要回复到这里了。
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麻辣王子不爱做实验
2楼2017-08-30 13:52:16
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zht930528

木虫 (正式写手)

麻辣王子
引用回帖:
3楼: Originally posted by 那片海dm at 2017-08-30 14:59:18
一般都是铺板24h之内转染，时间长了不好转，DNA和Lip2000的比例Lip2000说明书上有，不同厂家的应该不一样，铺板时不要加抗生素会影响转染效率的

铺的板24h后细胞密度确实不太高，50%左右的样子，细胞按理来讲24h与48h应该都是处在对数期，转染应该差不多的吧，我不是很清楚这个原因。 另外铺板时添加了抗生素，后边用PBS与无血清无抗培养基洗涤应该除的去抗生素的，我不是很理解这个影响有这么大吗？
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麻辣王子不爱做实验
4楼2017-08-30 15:16:02
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那片海dm

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zht930528 at 2017-08-30 15:16:02
铺的板24h后细胞密度确实不太高，50%左右的样子，细胞按理来讲24h与48h应该都是处在对数期，转染应该差不多的吧，我不是很清楚这个原因。 另外铺板时添加了抗生素，后边用PBS与无血清无抗培养基洗涤应该除的去抗生 ...

之前我铺的细胞如果24h没长满师姐都让我重新铺，而且我们铺板都是没加抗生素的，也不知道加了之后用PBS洗会不会有影响
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zht930528
5楼2017-08-30 15:22:28
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