应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 细胞科学 » 双荧光素酶报告实验，24孔板，质粒比例及总量，还有miRNA类似物共转染等问题
51/1返回列表
查看: 8286  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

zht930528

木虫 (正式写手)

麻辣王子

[求助] 双荧光素酶报告实验，24孔板，质粒比例及总量，还有miRNA类似物共转染等问题 已有3人参与

楼主小白一枚，在做双荧光素酶报告实验。

一： 肺癌细胞292，铺的24孔板，铺板前没计数，隔天镜检，细胞密度有点低，应该不到90%左右，可以再等一天转染不？


二：实验载体与海肾荧光素载体的比例多少合适呢？另外miRNA类似物加多少量？   


三：DNA的总量是加上miRNA类似物的嘛？


四：DNA总量与lipo2000的比例？


五：铺板用的培养基是含有抗生素的，转染前PBS清洗，这个影响大不大？ 转染前需要不需要细胞饥饿处理？


六：24孔板无血清无抗培养基500 uL ＋ 稀释质粒与稀释lipo2000的体积，终体积有多少？


问题比较多，请诸位做过的大神予以指点。
回复此楼

» 猜你喜欢
麻辣王子不爱做实验
1楼 2017-08-30 13:50:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

那片海dm

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
zht930528: 金币+10, ★★★很有帮助 2017-08-30 15:12:13
一般都是铺板24h之内转染，时间长了不好转，DNA和Lip2000的比例Lip2000说明书上有，不同厂家的应该不一样，铺板时不要加抗生素会影响转染效率的
赞一下 回复此楼
3楼2017-08-30 14:59:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答

zht930528

木虫 (正式写手)

麻辣王子
查了好多资料，也没搞太清楚明白。百度文库中相关知识的就不要回复到这里了。
赞一下 回复此楼
麻辣王子不爱做实验
2楼2017-08-30 13:52:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zht930528

木虫 (正式写手)

麻辣王子
引用回帖:
3楼: Originally posted by 那片海dm at 2017-08-30 14:59:18
一般都是铺板24h之内转染，时间长了不好转，DNA和Lip2000的比例Lip2000说明书上有，不同厂家的应该不一样，铺板时不要加抗生素会影响转染效率的

铺的板24h后细胞密度确实不太高，50%左右的样子，细胞按理来讲24h与48h应该都是处在对数期，转染应该差不多的吧，我不是很清楚这个原因。 另外铺板时添加了抗生素，后边用PBS与无血清无抗培养基洗涤应该除的去抗生素的，我不是很理解这个影响有这么大吗？
赞一下 回复此楼
麻辣王子不爱做实验
4楼2017-08-30 15:16:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

那片海dm

金虫 (小有名气)
引用回帖:
4楼: Originally posted by zht930528 at 2017-08-30 15:16:02
铺的板24h后细胞密度确实不太高，50%左右的样子，细胞按理来讲24h与48h应该都是处在对数期，转染应该差不多的吧，我不是很清楚这个原因。 另外铺板时添加了抗生素，后边用PBS与无血清无抗培养基洗涤应该除的去抗生 ...

之前我铺的细胞如果24h没长满师姐都让我重新铺，而且我们铺板都是没加抗生素的，也不知道加了之后用PBS洗会不会有影响
赞一下 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

zht930528
5楼2017-08-30 15:22:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 13 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 欢迎发来filecode的Mz6后的代码验证其规律 +31 医学老男孩 2026-08-13 69/3450 2026-08-16 00:16 by mo_mo_mo_mo
[基金申请] 有时候，自然基金真的不能太认真 （我的申报经验） +9 majunge000 2026-08-11 11/550 2026-08-15 23:20 by botar
[基金申请] filecode=后面第一个是大写字母 +6 wangze12014 2026-08-14 7/350 2026-08-15 20:12 by gltch
[基金申请] 哪位老哥知道今年的国自然具体哪一天放榜？ +7 Ldrop2023 2026-08-13 7/350 2026-08-15 15:57 by mzhh2000
[基金申请] 咱们一起用铁证分析2026国家社科基金中标与否 +7 启萌科技 2026-08-12 22/1100 2026-08-14 23:45 by Noways
[基金申请] 奇怪，两个人的filecode固定段从头到尾一模一样 +8 布布和一二 2026-08-10 11/550 2026-08-14 14:58 by Equinoxhua
[基金申请] 应该是93bebmhtak前后十一个字符比较关键 +23 Lanmanbaby 2026-08-09 37/1850 2026-08-14 13:40 by Equinoxhua
[硕博家园] 请教兼职经验 +3 是阿文鸭 2026-08-09 3/150 2026-08-14 12:07 by HER12025
[硕博家园] 读博的好处 +4 lnee 2026-08-11 4/200 2026-08-14 10:20 by ahsoarli
[基金申请] filecode +15 documentary 2026-08-10 17/850 2026-08-14 10:08 by kissu88
[基金申请] FileCode能看出啥？ +10 要乐观耀哥 2026-08-10 32/1600 2026-08-14 09:37 by 要乐观耀哥
[基金申请] 我的国基提前知道中了，可是同事的操作让我实在接受不了，怎么会有这样的人 +10 家与远方 2026-08-10 15/750 2026-08-14 02:08 by 绵羊哥哥
[基金申请] 重要来源：本周末出结果 +10 瞬息宇宙 2026-08-12 10/500 2026-08-13 15:46 by likettle
[基金申请] 不应该看fileCode +7 且听虎啸 2026-08-12 9/450 2026-08-13 14:27 by flydreamws
[基金申请] Filecode 又变了，巨变 +3 WH3796 2026-08-12 4/200 2026-08-13 14:13 by 小木虫6752397
[基金申请] 结合人工智能，周易传统文化，filecode打分制来了，3分以上希望很大。 +3 Tide man 2026-08-12 4/200 2026-08-13 08:35 by ZJTJZ
[基金申请] 2019年青年基金涵评意见，大家看看几个A，几个B? +11 Tide man 2026-08-11 11/550 2026-08-13 07:35 by 撸猫猫
[基金申请] 什么时候出结果，有咨询渠道？？？ +3 Tide man 2026-08-11 3/150 2026-08-11 17:54 by kudofaye
[基金申请] 确定了，国自然21号放榜 +6 布布和一二 2026-08-10 7/350 2026-08-10 19:15 by 2000zf36392
[基金申请] 国自然结果 +4 Vierhys 2026-08-10 8/400 2026-08-10 15:06 by Vierhys
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭