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Rembmiyc

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[交流] crispr cas9实验过程中遇到污染不知如何解决

求助

在构建cas9敲减质粒过程中遇到了目的片段污染问题

我是找公司合成需要的上下游目的片段到手后用DEPC水溶解然后上游引物连接

酶切载体跑琼脂糖胶切胶回收

T4连接酶连接

最后转化挑单克隆送测序

问题来了测序的结果反馈连入的并不是我合成的引物而是另一段片段大概40bp左右

我设计的引物是人13号染色体上的20+bp 而测序出来的是15号染色体上的40+bp

求助各位大神我的操作是不是哪里有问题

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1楼 2017-08-27 23:34:54

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