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Rembmiyc

新虫 (初入文坛)

[交流] crispr cas9实验过程中遇到污染不知如何解决

求助

在构建cas9敲减质粒过程中遇到了目的片段污染问题

我是找公司合成需要的上下游目的片段 到手后用DEPC水溶解 然后上游引物连接

酶切载体 跑琼脂糖胶 切胶回收

T4连接酶连接

最后转化挑单克隆送测序

问题来了 测序的结果反馈 连入的并不是我合成的引物而是另一段片段大概40bp左右

我设计的引物是人13号染色体上的20+bp 而测序出来的是15号染色体上的40+bp

求助各位大神 我的操作是不是哪里有问题

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