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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 层析/纯化 » 过离子交换柱
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冉超

新虫 (初入文坛)

[求助] 过离子交换柱 已有2人参与

阴离子交换柱，柱子用的GE的DEAE预装柱，缓冲液用的20mM的tris-hcl和1M的Nacl，PH均为8.0。过柱子的时候先用tris平衡，结果目的蛋白流出来了，后面用Nacl洗脱的时候，没有目的蛋白。

目的蛋白的等电点不清楚，在摸索缓冲液PH 的时候，用PH7的tris-hcl去溶解，几乎不溶。PH8条件下全部溶解。

样品是发酵产物，经硫酸铵沉淀后过GE脱盐柱，冷冻干燥得到的。

图如下，1.2号峰是活性峰，但是没经过氯化钠洗脱，就流出来了。

过离子交换柱
Chart.jpg
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1楼 2017-08-25 13:33:35
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xiangcx

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
样品是经过脱盐柱纯化冻干得到的，是不是脱盐的这 一步对后面纯化造成了这个影响啊？
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生活不止苟且和金钱，还有自然和远方。
2楼2017-08-26 16:09:20
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姣妹崽

新虫 (小有名气)
检测一下活性峰的纯度，如果纯度能达到要求，就乐了

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3楼2017-08-27 18:44:48
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自带光环?

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 姣妹崽 at 2017-08-27 18:44:48
检测一下活性峰的纯度，如果纯度能达到要求，就乐了

肯定不纯。这结果也不能用吧。。。

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4楼2017-08-27 20:27:46
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自带光环?

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by xiangcx at 2017-08-26 16:09:20
样品是经过脱盐柱纯化冻干得到的，是不是脱盐的这 一步对后面纯化造成了这个影响啊？

应该不是。脱盐说白了也是凝胶层析，对这个没啥影响吧

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5楼2017-08-27 20:28:46
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自带光环?

新虫 (初入文坛)
有没有大神帮忙解答一下。我今天测了样品的PH,发现我用PH8.0的tris-hcl溶解之后打算上柱的样品，PH是6，我又调到PH8.0，然后上柱，峰形还不如没调之前的，穿透峰变成了一个。

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6楼2017-08-27 20:32:20
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walking dead

金虫 (小有名气)

填料制备和蛋白纯化专家

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
从你的色谱图来看，用阴离子交换柱是直接流穿的，没有挂柱的。考虑你pH8.0缓冲液溶解样品后pH为6.0。用阳离子交换介质SP或CM试试。

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7楼2017-08-28 07:57:55
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张木0000

木虫 (正式写手)
先确定等电点吧，上DEAE的话缓冲液pH要高于等电点，有蛋白序列的话去Expasy预测一下大概的就行。等电点高的话就上CM呗…

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8楼2017-09-17 09:39:28
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diamond-snow

新虫 (初入文坛)
是不是蛋白溶液中含有盐，导致挂不上柱

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9楼2017-09-24 21:45:22
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wade2017

新虫 (初入文坛)
杂质吸附，目标流传多好啊

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10楼2017-09-30 22:35:41
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