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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 克隆载体构建时测序相关
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houge1160

禁虫 (初入文坛)
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1楼 2017-08-22 17:14:06
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回帖支持 ( 显示支持度最高的前 50 名 )

drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-08-24 07:45:08
重要的一点是，碱基突变是出现在同一个位置同一个突变，还是不同位置？不同位置是taq的问题，同一位置是你的模版有问题。
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Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
9楼2017-08-23 23:20:29
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木吉吉

新虫 (正式写手)
最近实验室有送Vazyme的试用装，比TAKARA的便宜而且很好扩，可以考虑下。你也可以比对下氨基酸序列是否一致，有些情况，如果氨基酸一致，不影响蛋白表达也是可以的，而且如果每次都是同样位点不一致那可能是模板问题，可能是库里序列就不准确，比如棉花的全基因组序列也没出来几年，所以库里序列也是有可能有偏差的

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12楼2017-08-25 18:53:00
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bbass533

禁虫 (小有名气)
★
感谢参与，应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-08-23 23:03:46
本帖内容被屏蔽
7楼2017-08-23 16:48:38
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游侠892

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

高保真酶不贵呀，怎么可能买不起呢？有你这么多测序的钱说不定都够买好多管高保真酶了。
如果是突变出现在同一位点，那说明序列本身就是这样子。
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路漫漫其修远兮，吾将上下而求索
11楼2017-08-25 17:33:49
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yufeiwaner

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

看一下氨基酸序列有没有变化，没变化就没问题。
实在不想买高保真酶，多换几种taq，设计几对引物扩增包含突变位点的序列，测出来哪个碱基多就算哪个。
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16楼2017-08-30 11:28:21
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碎碎小叶

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

普通Tag酶只是检测用的，PCR扩增片段要采用高保真酶，现在我们用的Mix，挺好用的。
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18楼2017-09-12 16:59:57
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普通回帖

前行的璐

新虫 (小有名气)
你用的什么酶扩的基因呢？高保真酶？
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2楼2017-08-22 17:16:30
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houge1160

禁虫 (初入文坛)
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3楼2017-08-22 17:57:08
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yangmeng0711

新虫 (小有名气)
用高保真酶

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4楼2017-08-22 19:28:47
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houge1160

禁虫 (初入文坛)
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5楼2017-08-23 11:24:03
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dellxiong

金虫 (初入文坛)
引用回帖:
5楼: Originally posted by houge1160 at 2017-08-23 11:24:03
太贵了，实验室买不起啊...

这样的话，得申请换实验室了~
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6楼2017-08-23 13:56:29
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yangmeng0711

新虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by dellxiong at 2017-08-23 13:56:29
这样的话，得申请换实验室了~...

我也觉得你可以换实验室了，高保真酶又不贵，小包装的二三百块钱吧

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8楼2017-08-23 19:25:22
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)
I think you could try the Hi-Fi polymerase in Takara company

PS, I'm not the worker in this company
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jiayoubashaonian
10楼2017-08-24 06:19:55
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