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houge1160

禁虫 (初入文坛)

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drwhoknowss

荣誉版主 (正式写手)

【答案】应助回帖


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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-08-24 07:45:08
重要的一点是,碱基突变是出现在同一个位置同一个突变,还是不同位置?不同位置是taq的问题,同一位置是你的模版有问题。
Progress in science depends on new techniques, new discoveries and new ideas, probably in that order. -- Nobel laureate Sydney Brenner
9楼2017-08-23 23:20:29
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木吉吉

新虫 (正式写手)

最近实验室有送Vazyme的试用装,比TAKARA的便宜而且很好扩,可以考虑下。你也可以比对下氨基酸序列是否一致,有些情况,如果氨基酸一致,不影响蛋白表达也是可以的,而且如果每次都是同样位点不一致那可能是模板问题,可能是库里序列就不准确,比如棉花的全基因组序列也没出来几年,所以库里序列也是有可能有偏差的

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12楼2017-08-25 18:53:00
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bbass533

禁虫 (小有名气)


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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-08-23 23:03:46
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7楼2017-08-23 16:48:38
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游侠892

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

高保真酶不贵呀,怎么可能买不起呢?有你这么多测序的钱说不定都够买好多管高保真酶了。
如果是突变出现在同一位点,那说明序列本身就是这样子。
路漫漫其修远兮,吾将上下而求索
11楼2017-08-25 17:33:49
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yufeiwaner

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

看一下氨基酸序列有没有变化,没变化就没问题。
实在不想买高保真酶,多换几种taq,设计几对引物扩增包含突变位点的序列,测出来哪个碱基多就算哪个。
16楼2017-08-30 11:28:21
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碎碎小叶

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

普通Tag酶只是检测用的,PCR扩增片段要采用高保真酶,现在我们用的Mix,挺好用的。
18楼2017-09-12 16:59:57
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普通回帖

前行的璐

新虫 (小有名气)

你用的什么酶扩的基因呢?高保真酶?
2楼2017-08-22 17:16:30
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houge1160

禁虫 (初入文坛)

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3楼2017-08-22 17:57:08
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yangmeng0711

新虫 (小有名气)

4楼2017-08-22 19:28:47
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houge1160

禁虫 (初入文坛)

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5楼2017-08-23 11:24:03
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dellxiong

金虫 (初入文坛)

引用回帖:
5楼: Originally posted by houge1160 at 2017-08-23 11:24:03
太贵了,实验室买不起啊...

这样的话,得申请换实验室了~
6楼2017-08-23 13:56:29
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yangmeng0711

新虫 (小有名气)

引用回帖:
6楼: Originally posted by dellxiong at 2017-08-23 13:56:29
这样的话,得申请换实验室了~...

我也觉得你可以换实验室了,高保真酶又不贵,小包装的二三百块钱吧

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8楼2017-08-23 19:25:22
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blackrose8089

铁杆木虫 (职业作家)

I think you could try the Hi-Fi polymerase in Takara company

PS, I'm not the worker in this company
jiayoubashaonian
10楼2017-08-24 06:19:55
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