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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 抗体/Elisa » 间接法ELISA本底超级高
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Silence_D

新虫 (初入文坛)

[求助] 间接法ELISA本底超级高 已有4人参与

间接法elisa，包被自己纯化的抗原4℃过夜（包被浓度0.5ng/ul，50ul/孔，pb包被液，设置pb缓冲液包被孔）；1%bsa 37℃封闭2h（包括pb包被孔，封闭液新配置）；一抗为血清，1:20稀释，50ul/孔，37℃育温1h；手洗板子，250ul/孔，5次；二抗hrp标记抗人igg，37℃育温30min；洗板，5次；显色15min，终止，450读数...结果连pb包被的孔读值都有0.5...一抗育温时间有缩短的必要吗？还有哪些操作会导致本底高？谢谢各位大神先...

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1楼 2017-08-18 18:06:39
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314300420

捐助贵宾 (著名写手)
一抗二抗浓度过高都会导致背景高

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2楼2017-08-22 04:45:27
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Ivan_s

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
1楼: Originally posted by Silence_D at 2017-08-18 18:06:39
间接法elisa，包被自己纯化的抗原4℃过夜（包被浓度0.5ng/ul，50ul/孔，pb包被液，设置pb缓冲液包被孔）；1%bsa 37℃封闭2h（包括pb包被孔，封闭液新配置）；一抗为血清，1:20稀释，50ul/孔，37℃育温1h；手洗板子， ...

封闭用的BSA浓度会不会有影响？

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3楼2018-09-06 20:12:20
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holderlin

新虫 (初入文坛)
背景高的决定因素是原料

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4楼2018-09-07 06:54:42
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feiyue122

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

一抗的浓度有点高啊，另外你的封闭剂有可能会与一抗产生交叉反应。
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5楼2018-10-11 10:00:23
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hanshuqi

禁虫 (初入文坛)
本帖内容被屏蔽
6楼2018-10-16 09:01:26
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junjieshao

禁虫 (小有名气)
本帖内容被屏蔽
7楼2019-04-27 01:23:21
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sangsandra

金虫 (正式写手)
请问这个问题解决了吗？现在遇到同样的问题，不知怎么解了。。。。
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8楼2021-06-23 22:43:10
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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

换一种封闭蛋白。
酪蛋白或鱼明胶。
BSA有可能混有IgG。
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生物资源交流QQ群：1044518333
9楼2021-06-30 08:27:56
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