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汕头大学海洋科学接受调剂
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Silence_D

新虫 (初入文坛)

[求助] 间接法ELISA本底超级高 已有4人参与

间接法elisa,包被自己纯化的抗原4℃过夜(包被浓度0.5ng/ul,50ul/孔,pb包被液,设置pb缓冲液包被孔);1%bsa 37℃封闭2h(包括pb包被孔,封闭液新配置);一抗为血清,1:20稀释,50ul/孔,37℃育温1h;手洗板子,250ul/孔,5次;二抗hrp标记抗人igg,37℃育温30min;洗板,5次;显色15min,终止,450读数...结果连pb包被的孔读值都有0.5...一抗育温时间有缩短的必要吗?还有哪些操作会导致本底高?谢谢各位大神先...

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snoopyzxx

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

换一种封闭蛋白。
酪蛋白或鱼明胶。
BSA有可能混有IgG。
VX:19192310212;公众号:生物技术与IVD
9楼2021-06-30 08:27:56
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314300420

捐助贵宾 (著名写手)

一抗二抗浓度过高都会导致背景高

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2楼2017-08-22 04:45:27
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Ivan_s

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
1楼: Originally posted by Silence_D at 2017-08-18 18:06:39
间接法elisa,包被自己纯化的抗原4℃过夜(包被浓度0.5ng/ul,50ul/孔,pb包被液,设置pb缓冲液包被孔);1%bsa 37℃封闭2h(包括pb包被孔,封闭液新配置);一抗为血清,1:20稀释,50ul/孔,37℃育温1h;手洗板子, ...

封闭用的BSA浓度会不会有影响?

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3楼2018-09-06 20:12:20
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holderlin

新虫 (初入文坛)

背景高的决定因素是原料

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4楼2018-09-07 06:54:42
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