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新虫 (初入文坛)

[求助] 关于钙离子荧光探针fluo-3的问题 已有1人参与

哪位朋友在植物细胞上应用过fluo-3探针,最近做了很多次实验,不知道什么问题,总是检测不到钙离子荧光,在荧光显微镜下观察,什么都看不到。细胞原生质体活力用FDA检测过了,没有问题。请有经验的朋友帮帮忙。万分感谢

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1361120671

新虫 (初入文坛)

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引用回帖:
2楼: Originally posted by ywwabc at 2017-08-21 16:40:22
1、检测前细胞洗干净,不要有血清干扰
2、确定fluo-3探针没有过期,荧光没有淬灭
3、荧光显微镜分辨率不高
4、可以试试加长孵育时间,少清洗一遍
5、加大fluo-3探针浓度(实验结果都是对比出来的,每组处理一样 ...

想问您一下,如何确定是否发生荧光淬灭?还有就是如果用激光共聚焦显微镜效果是不是好很多

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3楼2017-08-23 11:10:40
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ywwabc

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1、检测前细胞洗干净,不要有血清干扰
2、确定fluo-3探针没有过期,荧光没有淬灭
3、荧光显微镜分辨率不高
4、可以试试加长孵育时间,少清洗一遍
5、加大fluo-3探针浓度(实验结果都是对比出来的,每组处理一样就可以,加的多少及孵育时间多上的影响不大的)

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2楼2017-08-21 16:40:22
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ywwabc

新虫 (小有名气)

引用回帖:
3楼: Originally posted by 1361120671 at 2017-08-23 11:10:40
想问您一下,如何确定是否发生荧光淬灭?还有就是如果用激光共聚焦显微镜效果是不是好很多
...

是的,共聚焦对荧光灵敏一些,是否发生淬灭那就试试标记细胞后先别清洗,直接看,如果有很强的荧光,那就说明没有淬灭或者淬灭的不严重,还是可以用的,如果不清洗看的荧光就很弱,那就说明用不成了啊
4楼2017-08-23 16:50:20
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1361120671

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
4楼: Originally posted by ywwabc at 2017-08-23 16:50:20
是的,共聚焦对荧光灵敏一些,是否发生淬灭那就试试标记细胞后先别清洗,直接看,如果有很强的荧光,那就说明没有淬灭或者淬灭的不严重,还是可以用的,如果不清洗看的荧光就很弱,那就说明用不成了啊...

好的谢谢。我再试试看

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5楼2017-08-23 20:38:30
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