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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 动植物 » 实验技术 » 关于钙离子荧光探针fluo-3的问题
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1361120671

新虫 (初入文坛)

[求助] 关于钙离子荧光探针fluo-3的问题 已有1人参与

哪位朋友在植物细胞上应用过fluo-3探针，最近做了很多次实验，不知道什么问题，总是检测不到钙离子荧光，在荧光显微镜下观察，什么都看不到。细胞原生质体活力用FDA检测过了，没有问题。请有经验的朋友帮帮忙。万分感谢

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1楼 2017-08-17 18:08:35
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1361120671

新虫 (初入文坛)
送红花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by ywwabc at 2017-08-21 16:40:22
1、检测前细胞洗干净，不要有血清干扰
2、确定fluo-3探针没有过期，荧光没有淬灭
3、荧光显微镜分辨率不高
4、可以试试加长孵育时间，少清洗一遍
5、加大fluo-3探针浓度（实验结果都是对比出来的，每组处理一样 ...

想问您一下，如何确定是否发生荧光淬灭？还有就是如果用激光共聚焦显微镜效果是不是好很多

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3楼2017-08-23 11:10:40
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ywwabc

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

1、检测前细胞洗干净，不要有血清干扰
2、确定fluo-3探针没有过期，荧光没有淬灭
3、荧光显微镜分辨率不高
4、可以试试加长孵育时间，少清洗一遍
5、加大fluo-3探针浓度（实验结果都是对比出来的，每组处理一样就可以，加的多少及孵育时间多上的影响不大的）
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1361120671
2楼2017-08-21 16:40:22
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ywwabc

新虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 1361120671 at 2017-08-23 11:10:40
想问您一下，如何确定是否发生荧光淬灭？还有就是如果用激光共聚焦显微镜效果是不是好很多
...

是的，共聚焦对荧光灵敏一些，是否发生淬灭那就试试标记细胞后先别清洗，直接看，如果有很强的荧光，那就说明没有淬灭或者淬灭的不严重，还是可以用的，如果不清洗看的荧光就很弱，那就说明用不成了啊
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4楼2017-08-23 16:50:20
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1361120671

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
4楼: Originally posted by ywwabc at 2017-08-23 16:50:20
是的，共聚焦对荧光灵敏一些，是否发生淬灭那就试试标记细胞后先别清洗，直接看，如果有很强的荧光，那就说明没有淬灭或者淬灭的不严重，还是可以用的，如果不清洗看的荧光就很弱，那就说明用不成了啊...

好的谢谢。我再试试看

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5楼2017-08-23 20:38:30
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