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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 核酸提取 » 想请教一下大家RNA提取问题
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洋小妞baby

新虫 (初入文坛)

[交流] 想请教一下大家RNA提取问题 已有5人参与

今天提了4个样品的RNA,用的是天根的多糖多酚试剂盒，用的是植物叶片，感觉纤维比较多，研磨成粉的时候好像就没有研磨那么细，肉眼可见还是有纤维的，想问一下大家需要要研磨的很细吗？还有粉末加入量以多少合适呢，用700微升的裂解液？不知道加完裂解液离心时间太短还是转速太低，上清液里还有好多细小粉末？可能我吸取上清液的时候枪头有碰碰侧壁的组织碎片，所以提取的RNA质量不太好，不知道是这个原因吗？

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1楼 2017-08-12 21:13:16
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hermitcraby

新虫 (小有名气)
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西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-08-13 08:55:23
研的越细破碎细胞效果越好，固然提取得效果也越好。粉末大概100-300ul都可以，多了提取效果反而不好

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2楼2017-08-12 21:30:19
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hermitcraby

新虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
研磨完放到EP管里就看出体积了

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4楼2017-08-13 15:43:42
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洋小妞baby

新虫 (初入文坛)
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6楼: Originally posted by 学长阿亮 at 2017-08-16 20:52:04
磨样的时候还是细一点儿比较好，并且试剂盒里的吸附柱有承受上限，不用加太多粉末，天根的RNA试剂盒优点在于提取的RNA很干净，但浓度倒不会很高，做个定量什么的肯定够了的

想问一下我这个RNA用来做荧光定量pcr可以不
想请教一下大家RNA提取问题



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13楼2017-08-18 12:13:47
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洋小妞baby

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by hermitcraby at 2017-08-12 21:30:19
研的越细破碎细胞效果越好，固然提取得效果也越好。粉末大概100-300ul都可以，多了提取效果反而不好

为什么粉末体积是微升呢，怎么看他的体积呢

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3楼2017-08-12 21:44:33
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1393684991

新虫 (初入文坛)
★
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我用的也是天根的，提取棉花叶片RNA，上面写离心1min，我感觉时间太短了啊，不知道延长离心时间有没有影响
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5楼2017-08-16 20:04:01
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学长阿亮

铁虫 (初入文坛)
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西门吹雪170: 金币+2, 鼓励回帖交流 2017-08-17 07:48:40
磨样的时候还是细一点儿比较好，并且试剂盒里的吸附柱有承受上限，不用加太多粉末，天根的RNA试剂盒优点在于提取的RNA很干净，但浓度倒不会很高，做个定量什么的肯定够了的
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6楼2017-08-16 20:52:04
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leannele

金虫 (小有名气)
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-08-17 07:49:14
我提叶片的时候有纤维都拿出来了，哈哈哈。离心用了5分钟

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7楼2017-08-16 22:01:31
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洋小妞baby

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 学长阿亮 at 2017-08-16 20:52:04
磨样的时候还是细一点儿比较好，并且试剂盒里的吸附柱有承受上限，不用加太多粉末，天根的RNA试剂盒优点在于提取的RNA很干净，但浓度倒不会很高，做个定量什么的肯定够了的

是吧，我就感觉提的RNA浓度都比较低，大概在500-600ng每微升，有时还400，特别低

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8楼2017-08-18 12:01:55
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洋小妞baby

新虫 (初入文坛)
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7楼: Originally posted by leannele at 2017-08-16 22:01:31
我提叶片的时候有纤维都拿出来了，哈哈哈。离心用了5分钟

厉害啦，我后来研磨都把纤维研细啦，哈哈

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9楼2017-08-18 12:04:06
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洋小妞baby

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
6楼: Originally posted by 学长阿亮 at 2017-08-16 20:52:04
磨样的时候还是细一点儿比较好，并且试剂盒里的吸附柱有承受上限，不用加太多粉末，天根的RNA试剂盒优点在于提取的RNA很干净，但浓度倒不会很高，做个定量什么的肯定够了的

吸附柱不是吸附RNA的吗，有上限吗？是过滤柱有上限吧，我这两天做实验过滤的时候柱子老堵

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10楼2017-08-18 12:07:42
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