| 查看: 1734 | 回复: 3 | ||
[求助]
链霉亲和素的beads为什么不能拉下生物素化的蛋白 已有1人参与
|
|
求助：最近在做蛋白质相互作用的实验，但是不知道为什么input里有有，但是IP什么也没有，连外源转入的生物素化的蛋白也富集不下来？ 发自小木虫IOS客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有165人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
【答案】应助回帖
感谢参与，应助指数 +1
|
（1）洗脱条件太温和（标记的蛋白质仍然结合在柱上，结合力较强） 策略：用增加咪唑的梯度洗脱或降低pH 来找出最佳的洗脱条件。 （2）降低PH的方法洗脱的,因 为若PH低于3.5,会导致镍离子脱落 策略：改变洗脱办法,咪唑竞争性洗脱 （3）蛋白已沉淀在柱上 策略：减少上样量和孵育的时间，试用去污剂(1%-2%Tritonx-100)或改变NaCl的浓度，或在变性条件下洗脱(用8M脲，或6M盐酸胍)，最终也可在洗脱Buffer中加入2mMDTT或者0.5%肌氨酸钠进行洗脱。 （4）非特异性疏水或其他相互反应 策略：加非离子去污剂到洗脱缓冲液（如，2%Triton X-100）或增加NaCl的浓度。 |
2楼2017-08-06 23:45:42
3楼2017-08-07 09:58:58
yubeihong
铁杆木虫 (职业作家)
- 应助: 20 (小学生)
- 金币: 7537.3
- 散金: 605
- 红花: 40
- 帖子: 3051
- 在线: 641小时
- 虫号: 253258
- 注册: 2006-05-20
- 性别: GG
- 专业: 生物化工与食品化工
4楼2018-05-22 22:28:44
