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链霉亲和素的beads为什么不能拉下生物素化的蛋白已有1人参与
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求助：最近在做蛋白质相互作用的实验，但是不知道为什么input里有有，但是IP什么也没有，连外源转入的生物素化的蛋白也富集不下来？ 发自小木虫IOS客户端 |
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yubeihong
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4楼2018-05-22 22:28:44
晋鹏
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【答案】应助回帖
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（1）洗脱条件太温和（标记的蛋白质仍然结合在柱上，结合力较强） 策略：用增加咪唑的梯度洗脱或降低pH 来找出最佳的洗脱条件。 （2）降低PH的方法洗脱的,因 为若PH低于3.5,会导致镍离子脱落 策略：改变洗脱办法,咪唑竞争性洗脱 （3）蛋白已沉淀在柱上 策略：减少上样量和孵育的时间，试用去污剂(1%-2%Tritonx-100)或改变NaCl的浓度，或在变性条件下洗脱(用8M脲，或6M盐酸胍)，最终也可在洗脱Buffer中加入2mMDTT或者0.5%肌氨酸钠进行洗脱。 （4）非特异性疏水或其他相互反应 策略：加非离子去污剂到洗脱缓冲液（如，2%Triton X-100）或增加NaCl的浓度。 |
2楼2017-08-06 23:45:42
3楼2017-08-07 09:58:58