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在构建RNA干扰载体中，目的片段与PLKO.1的连接问题 已有1人参与
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新人求教 1、在合成我的干扰片段后（上海生工合成），发现目的片段的5`端是没有磷酸化的，而是羟基。因为在DNA连接时要形成3`-5`磷酸二酯键，这样目的片段和我的载体不是没有办法连接了？看了所有教程，都没有谈到5`端需要磷酸化，是不是默认合成的5端都没有磷酸化？ 2、关于1的问题，我想到在单酶切载体，为了防止自身环化而用碱性磷酸酶把载体的5`端磷酸集团转为羟基，那目的片段再连接的时候是怎么连上的？ |
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