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_zhangyyy123

新虫 (初入文坛)

[求助] 电泳拖带的问题 已有1人参与

之前做了一扩,结果不理想,有座了二扩,直接拿的一扩产物做的模板,结果条带和一扩的差不多。后来想着是不是模板浓度太高,又把它给稀释了一下(一扩产物),第一次是用稀释20倍的产物做的模板,有一点条带,退火温度55℃左右,第二次就稀释了50--100倍,用这些模板再做了一次pcr,结果发现拖带的情况很严重,我想问下各位这种情况除了是dna发生了降解,还有可能是什么原因呢?求各位大神解答,拜托了,这个实验就因为这个电泳的问题拖了很久了,希望能给很快给解决了!
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wangranjun

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广庭之惘然

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【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
西门吹雪170: 金币+1, 鼓励回帖交流 2017-07-26 07:45:43
你要看看模板DNA有没有蛋白污染。从质粒里面扩增还是基因组DNA?后者因为不存,而且提取过程中容易混入蛋白污染,有时候会出现类似的情况。
祝顺利。
他日扬翼九万里,历大千世界,定我红尘心!
2楼2017-07-25 17:41:35
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_zhangyyy123

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
2楼: Originally posted by wangranjun at 2017-07-25 17:41:35
你要看看模板DNA有没有蛋白污染。从质粒里面扩增还是基因组DNA?后者因为不存,而且提取过程中容易混入蛋白污染,有时候会出现类似的情况。
祝顺利。

确实是提取的基因组DNA,但是昨天用稀释了20倍的样品做模板却没有出现这种情况,我觉得应该不是蛋白污染
3楼2017-07-25 19:38:59
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