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美不美先看腿

金虫 (小有名气)

[求助] 谷氨酰胺合成酶测定已有1人参与

谷氨酰胺合成酶测定时以反应液A为对照，那调零是用哪个呢？酶活性和可溶性蛋白关系时负相关吗，公式又是如何计算的呢？
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1楼2017-07-22 23:05:31
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醉石郝宝宝

新虫 (正式写手)
您好，可以和您请教一下谷氨酰胺合成酶的测定方法吗，遇到了和您一样的问题，希望可以得到您的帮助，谢谢。
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7楼2020-09-15 16:38:27
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yanchao504

铁虫 (正式写手)
晋鹏: 屏蔽内容, 求助帖子，禁止闲聊无关内容~ 2017-08-02 15:03:39
本帖内容被屏蔽
2楼2017-07-23 08:11:41
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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
剑叶硝酸还原酶（NR）活性的测定  采用活体法测定。
谷氨酰胺合成酶（GS）活性的测定  称取籽粒1g于研钵中，加3ml提取缓冲液（0.05mol/L Tris-HCl，pH8.0），置冰浴上研磨匀浆，转移于离心管中，4℃下16114×g离心20min，上清液即为粗酶液。在1.6mL反应混合液（0.1mol/L Tris-HCl缓冲液，80mol/L盐酸羟胺，pH7.4）中，加入0.7mL粗酶液和0.7mL 40mmol/L ATP溶液，混匀，于37℃下保温0.5h，加入显色剂（0.2mol/L TCA，0.37mol/LFeCl3和0.6mol/L HCl混合液）1mL，摇匀并放置片刻后，于1790×g下离心10min，取上清液测定540nm处的吸光值，以加入1.6mL反应混合液（0.1mol/L Tris-HCl缓冲液，pH7.4）为对照。
谷氨酸合成酶（GOGAT）活性的测定    参照Lin（1996）的方法，反应混合物总体积3mL（内含0.4mL 20mML-谷氨酰胺，0.05mL 0.1Mα-酮戊二酸，0.1mL 10mMKCl，0.2mL3mM NADH和0.5mL酶液，不足体积用25mM pH7.6 Tris-HCl缓冲液补足），反应由L-谷氨酰胺启动，340nm下测定消光值的变化。1min下降的消光值作为一个酶活性单位。
谷氨酸脱氢酶（GDH）活性的测定    参照Lin（1996）的方法。称取鲜样1.000g置于预先冷冻过的研钵中，加入少量石英砂和6mL提取液（10mMTris-HCl缓冲液，pH7.6，内含1mMMgCl2，1mMEDTA和1mM的β-巯基乙醇），冰浴下研磨至匀浆，倒入离心管，4℃下15000×g离心30min，上清液即为酶液。反应混合物中包括0.3mL0.1mMα-酮戊二酸，0.3mL1MNH4Cl，0.2mL3mMNADH和1mL酶提取液，不足体积用0.2MTris-HCl缓冲液补足，反应由酶液启动，340nm下测定消光值的变化。1min下降的消光值作为一个酶活性单位。
根据测定对象，每个方法中得样品量可以减少。
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及时行乐，人生不留遗憾！
3楼2017-07-23 09:21:26
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美不美先看腿

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by 晋鹏 at 2017-07-23 09:21:26
剑叶硝酸还原酶（NR）活性的测定  采用活体法测定。
谷氨酰胺合成酶（GS）活性的测定  称取籽粒1g于研钵中，加3ml提取缓冲液（0.05mol/L Tris-HCl，pH8.0），置冰浴上研磨匀浆，转移于离心管中，4℃下16114×g离心 ...

调零用的是对照的那杯吗？是根据可溶性蛋白间接计算出的吗？是不是还有一种直接测定的方法？
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4楼2017-07-24 15:30:11
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