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jiyanhai1988

新虫 (初入文坛)

[求助] 谁有GOT GPT GS 的测定方法啊

谁有测定谷氨酰胺合成酶（GS）、谷氨酸草酰乙酸转氨酶（GOT）、谷氨酸丙酮酸转氨酶（GPT）的测定方法，要详细的测定方法。
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1楼 2011-11-14 15:21:02
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缺友情

荣誉版主 (文学泰斗)

此漂已死，有事烧纸 4-8

优秀版主

【答案】应助回帖

不知道你的要求高不高，据我所知很多试剂公司都有这几种酶的试剂盒，根据试剂盒上的方法测就可以了。一般只需要稍作前处理就好。
我们这边很多人用的是南京建成的试剂盒。你也可以到北京那边看看有哪些公司做这个试剂盒的
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有些累了，淡了，该去了～
2楼2011-11-14 15:38:48
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zx523591673

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

这几个酶我去年测过，我是用试剂盒测的，不知道你可以用吗
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态度决定一切
3楼2011-11-14 17:21:35
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wavegjl

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
木虫/panda(金币+10, 农林EPI+1): 感谢您的积极应助，欢迎常来农林版~ 2011-11-16 22:24:50
jiyanhai1988(金币+2): 谢谢 2011-11-19 18:50:56
GOT和GPT我以前测过，GPT方法也有，见下面。如果实验经费不紧张的话，建议用试剂盒测，测起来比较方便。且GOT和GPT的试剂盒价格不贵的，一般用的是南京建成的。

谷氨酸丙酮酸转氨酶（SGPT）测定（King氏法）
原      理

生物体内转氨基作用是α-氨基酸的氨基通过酶促作用转移到α-酮酸的酮基位置上，生成相应的酮酸与氨基酸的化学反应。催化这反应的酶称尾转氨酶，其辅酶为磷酸吡哆醛。转氨酶广泛存在于存在机体的各种组织中，在肝、心、肾等组织中的谷丙转氨酶（glutamic pyruvic transaminase,GPT）,谷草转氨酶（glutamic oxalacetic transaminase,GOT）活性较高。在正常新陈代谢过程中，血清内维持一定水平的转氨酶活性（即正常值）。当肝、心、肾等组织发生病变时，由于组织细胞肿胀，坏死导致大量的酶释放至血流中，从而引起血清谷丙转氨酶（GPT）、谷草转氨酶（GOT）活性显著升高。因此测定这些酶的活性对某些疾病的临床诊断具有重要的参考价值。
本实验用丙氨酸和α-酮戊二酸为底物（基质液成分）经谷丙转氨酶作用生成谷氨酸及丙氨酸。丙氨酸与2，4-二硝基苯肼作用生成2，4-二硝基苯腙，此物在碱性条件下呈棕红色。根据棕红色的深浅与同样处理的丙酮酸标准液进行比较，即可计算出酶的活性。其反应过程如下：
King 氏法谷丙氨酸转氨酶活性单位：每毫升血清在37℃与PH7.4的基质液作用60min，生成1μmol 丙酮酸为一个单位。临床检验取血清量为0.1mL, 报告数据以100mL血清计算，因此实际测得结果乘1000即可。例如0.1mL丙酮酸标准中丙酮酸含量为0.2μmol,即相当GPT200U/100ml血清。

试 剂 与 器 材
一、        样品
  组织液或血清。
二、试剂
1．        甲液（1/15mol/L 磷酸氢二钠溶液）
称取磷酸氢二钠9.47g或含水磷酸氢二钠23.87g溶于蒸馏水中定容至1000ml.
2. 乙液(1/15 mol/L磷酸二氢钾溶液)
称取磷酸二氢钾9.078g溶于蒸馏水中.定容至1000ml.
取甲液825ml,乙液175ml混合,此液pH应为7.4.
3. GPT基质液
称取α-酮戊二酸29.2mg(2m mol/l)及α-DL-丙氨酸1.78g(200 m mol/l) 溶于50mlpH7.4的磷酸缓冲液中,加0.1mol/L NaOH溶液约0.5mL,调节pH为7.4,然后加磷酸缓冲液定容至100mL.加少许氯仿防腐,置冰箱中保存.
4. 2,4-二硝基苯肼(1 m mol/L)
称2,4-二硝基苯肼20mg. 先溶于10mL浓盐酸中,使其溶解.再以蒸馏水定容至100mL.
5. 丙酮酸标准液
精确称取丙酮酸钠22mg.加磷酸缓冲液后定容至100 mL.此液浓度为2μmol/mL, 临用前配置制.
0.4mol/L NaOH溶液,1/15 mol/L 磷酸缓冲液(pH 7.4).

三、 器材

试管及试管架，移液管（0.5mL,1mL,5mL）,量筒(10mL,100mL), 恒温水浴,722型分光光度计,坐标纸.

操 作 方 法

一、制备标准曲线
取12支试管，按下表操作作平行管：

试管编号
试剂处理                       空白管        测       定      管
                1        2        3        4        5
丙酮酸标准液/mL        -        0.05        0.10        0.15        0.20        0.25
基质液/mL        0.50        0.45        0.40        0.35        0.30        0.25
磷酸缓冲液/mL        0.10        0.10        0.10        0.10        0.10        0.10
各管摇匀后,置37℃水浴,保温10min
2,4-二硝基苯肼/mL        0.50        0.50        0.50        0.50        0.50        0.50
各管摇匀后,置37℃水浴,保温20min
0.4mol/LNaOH/mL        5.00        5.00        5.00        5.00        5.00        5.00
充分摇匀后,在30min内,520nm波长下比色
相当丙酮酸实际含量/μmol
-        -
        0.10        0.20        0.30        0.40        0.50
相当GTP单位/100mL血清
-        -
        100        200        300        400        500
各管光吸收A520值                                               
各测定管减空白A520值差                                               


二、 绘制标准曲线

以光吸收值为纵坐标，酶活性单位为横坐标，在坐标纸上绘制各测得A520值与对应的酶活性单位数的标准曲线。

三、 样品及回收率测定

取10支干试管，按下表平行操作：





           试管编号
   试剂处理              
        Ⅰ标准空白管        Ⅱ标准管        Ⅲ血清空白管        Ⅳ血清管        Ⅴ血清加标准管
血清/mL        -        -        0.1        0.1        0.05
磷酸缓冲溶液/mL        0.10        -        -        -        -
丙酮酸标准液/Ml        -        0.10        -        -        0.05
基质液/mL        -        0.50        -        0.50        0.50
各管摇匀后,置37℃水浴,保温60min
基质液        0.50        -        0.50        -        -
2,4-二硝基苯肼/mL        0.50        0.50        0.50        0.50        0.50
各管摇匀后,置37℃水浴,保温20min
0.4mol/L NaOH/mL        5.00        5.00        5.00        5.00        5.00
            充分摇匀后,在520nm波长下比色,以蒸馏水校正光吸收为零
各管A520值                                       
各测定管减空白A520值差                                       


四、 结果计算
1.        标准曲线测定法
根据样品管A520值(已减去空白管A520) 查标准曲线,即得每100mL血清中转氨酶活性单位数.
2.        标准管测定法
每次测定酶活性时,同时用丙酮酸标准液(2μmol/mL)0.1mL,平行操作,即按上表操作,不做标准曲线,测定A520,按公式计算:
                       样品管A520                                        Ⅳ - Ⅲ
标准管A520
Ⅱ- Ⅰ
GPT(U)/100mL  血清=                ×200=         ×200

用本法测得人血清GTP正常值为91±35.8(U)/100mL血清.
3.        计算回收率
     回收率%  =   实际测得值(样品加标准测得值)       ×100
理论计算值[（样品+标准计算值）/2]
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持之以恒！
4楼2011-11-16 10:11:19
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曙光无限

新虫 (正式写手)
169838178  欢迎加群 一同学习酶 另外欢迎邀请您身边的好友一同学习
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5楼2014-10-21 15:33:35
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美不美先看腿

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by 缺友情 at 2011-11-14 15:38:48
不知道你的要求高不高，据我所知很多试剂公司都有这几种酶的试剂盒，根据试剂盒上的方法测就可以了。一般只需要稍作前处理就好。
我们这边很多人用的是南京建成的试剂盒。你也可以到北京那边看看有哪些公司做这个试 ...

除了南京建成的，还有别家的试剂盒好用的吗？南京的停产了
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6楼2017-04-08 10:50:49
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美不美先看腿

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zx523591673 at 2011-11-14 17:21:35
这几个酶我去年测过，我是用试剂盒测的，不知道你可以用吗

什么试剂盒好用呢
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7楼2017-04-08 10:51:05
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