| 查看: 3120 | 回复: 6 | ||
| 本帖产生 1 个 农林EPI ，点击这里进行查看 | ||
jiyanhai1988新虫 (初入文坛)
|
[求助]
谁有GOT GPT GS 的测定方法啊
|
|
| 谁有测定谷氨酰胺合成酶（GS）、谷氨酸草酰乙酸转氨酶（GOT）、谷氨酸丙酮酸转氨酶（GPT）的测定方法，要详细的测定方法。 |
回复此楼» 猜你喜欢
国自然面上和省基金B类撒花
已经有6人回复
-
华师大读博
已经有5人回复
-
又一批高校组建人工智能学院 师资行吗 不是骗人吗
已经有5人回复
-
0854求调剂
已经有28人回复
-
急需审稿人！！！
已经有3人回复
-
申博/考博
已经有8人回复
-
一志愿A区211，22408 321求调剂
已经有8人回复
-
295分求调剂
已经有6人回复
-
一志愿中科大材料与化工，353分还有调剂学校吗
已经有13人回复
-
085600材料与化工调剂
已经有6人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于生长曲线的测定
已经有10人回复
- [GPC求助]GPC测定水溶性高分子分子量
已经有16人回复
- 无机粉煤灰中的羟基的如何定性和定量测定
已经有5人回复
- 求助测定六价铬及总铬浓度的测定方法
已经有6人回复
- 谁有NSFCProposal2011.exe书写软件！急！急！急！
已经有5人回复
- 我数一二三，我们转身一起走，谁也不许回头
已经有41人回复
- 谁了解新药报批中用校正因子方法测定有关物质
已经有11人回复
- 【求助】请教一下测定油样的羟基自由基的详细过程
已经有16人回复
- 谁知道补填路面的沟壑用的环氧树脂AB胶与水泥混合的比例
已经有2人回复
- 【求助】请问大家有谁知道用什么方法可以显示300M超高强度钢的奥氏体晶粒度？
已经有26人回复
- 【求助】急！！有谁收到过德国寄的快件啊
已经有17人回复
- 【求助】有关总黄酮的含量测定方法，请教！！！
已经有21人回复
缺友情
荣誉版主 (文学泰斗)
此漂已死，有事烧纸 4-8
- 农林EPI: 13
- 应助: 170 (高中生)
- 贵宾: 1.632
- 金币: 9281.6
- 散金: 44695
- 红花: 228
- 沙发: 488
- 帖子: 50443
- 在线: 2489.8小时
- 虫号: 878394
- 注册: 2009-10-20
- 专业: 水产养殖学
- 管辖: 农林
2楼2011-11-14 15:38:48
zx523591673
金虫 (正式写手)
- 应助: 7 (幼儿园)
- 金币: 2014.4
- 帖子: 343
- 在线: 147.5小时
- 虫号: 1180554
- 注册: 2010-12-30
- 性别: GG
- 专业: 畜牧学
3楼2011-11-14 17:21:35
wavegjl
木虫 (正式写手)
- 农林EPI: 1
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 3429.1
- 帖子: 348
- 在线: 83.3小时
- 虫号: 751479
- 注册: 2009-04-18
- 性别: GG
- 专业: 水产生物营养与饲料学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
木虫/panda(金币+10, 农林EPI+1): 感谢您的积极应助，欢迎常来农林版~ 2011-11-16 22:24:50
jiyanhai1988(金币+2): 谢谢 2011-11-19 18:50:56
木虫/panda(金币+10, 农林EPI+1): 感谢您的积极应助，欢迎常来农林版~ 2011-11-16 22:24:50
jiyanhai1988(金币+2): 谢谢 2011-11-19 18:50:56
|
GOT和GPT我以前测过，GPT方法也有，见下面。如果实验经费不紧张的话，建议用试剂盒测，测起来比较方便。且GOT和GPT的试剂盒价格不贵的，一般用的是南京建成的。 谷氨酸丙酮酸转氨酶（SGPT）测定（King氏法） 原 理 生物体内转氨基作用是α-氨基酸的氨基通过酶促作用转移到α-酮酸的酮基位置上，生成相应的酮酸与氨基酸的化学反应。催化这反应的酶称尾转氨酶，其辅酶为磷酸吡哆醛。转氨酶广泛存在于存在机体的各种组织中，在肝、心、肾等组织中的谷丙转氨酶（glutamic pyruvic transaminase,GPT）,谷草转氨酶（glutamic oxalacetic transaminase,GOT）活性较高。在正常新陈代谢过程中，血清内维持一定水平的转氨酶活性（即正常值）。当肝、心、肾等组织发生病变时，由于组织细胞肿胀，坏死导致大量的酶释放至血流中，从而引起血清谷丙转氨酶（GPT）、谷草转氨酶（GOT）活性显著升高。因此测定这些酶的活性对某些疾病的临床诊断具有重要的参考价值。 本实验用丙氨酸和α-酮戊二酸为底物（基质液成分）经谷丙转氨酶作用生成谷氨酸及丙氨酸。丙氨酸与2，4-二硝基苯肼作用生成2，4-二硝基苯腙，此物在碱性条件下呈棕红色。根据棕红色的深浅与同样处理的丙酮酸标准液进行比较，即可计算出酶的活性。其反应过程如下： King 氏法谷丙氨酸转氨酶活性单位：每毫升血清在37℃与PH7.4的基质液作用60min，生成1μmol 丙酮酸为一个单位。临床检验取血清量为0.1mL, 报告数据以100mL血清计算，因此实际测得结果乘1000即可。例如0.1mL丙酮酸标准中丙酮酸含量为0.2μmol,即相当GPT200U/100ml血清。 试 剂 与 器 材 一、 样品 组织液或血清。 二、试剂 1． 甲液（1/15mol/L 磷酸氢二钠溶液） 称取磷酸氢二钠9.47g或含水磷酸氢二钠23.87g溶于蒸馏水中定容至1000ml. 2. 乙液(1/15 mol/L磷酸二氢钾溶液) 称取磷酸二氢钾9.078g溶于蒸馏水中.定容至1000ml. 取甲液825ml,乙液175ml混合,此液pH应为7.4. 3. GPT基质液 称取α-酮戊二酸29.2mg(2m mol/l)及α-DL-丙氨酸1.78g(200 m mol/l) 溶于50mlpH7.4的磷酸缓冲液中,加0.1mol/L NaOH溶液约0.5mL,调节pH为7.4,然后加磷酸缓冲液定容至100mL.加少许氯仿防腐,置冰箱中保存. 4. 2,4-二硝基苯肼(1 m mol/L) 称2,4-二硝基苯肼20mg. 先溶于10mL浓盐酸中,使其溶解.再以蒸馏水定容至100mL. 5. 丙酮酸标准液 精确称取丙酮酸钠22mg.加磷酸缓冲液后定容至100 mL.此液浓度为2μmol/mL, 临用前配置制. 0.4mol/L NaOH溶液,1/15 mol/L 磷酸缓冲液(pH 7.4). 三、 器材 试管及试管架，移液管（0.5mL,1mL,5mL）,量筒(10mL,100mL), 恒温水浴,722型分光光度计,坐标纸. 操 作 方 法 一、制备标准曲线 取12支试管，按下表操作作平行管： 试管编号 试剂处理 空白管 测 定 管 1 2 3 4 5 丙酮酸标准液/mL - 0.05 0.10 0.15 0.20 0.25 基质液/mL 0.50 0.45 0.40 0.35 0.30 0.25 磷酸缓冲液/mL 0.10 0.10 0.10 0.10 0.10 0.10 各管摇匀后,置37℃水浴,保温10min 2,4-二硝基苯肼/mL 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 各管摇匀后,置37℃水浴,保温20min 0.4mol/LNaOH/mL 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 充分摇匀后,在30min内,520nm波长下比色 相当丙酮酸实际含量/μmol - - 0.10 0.20 0.30 0.40 0.50 相当GTP单位/100mL血清 - - 100 200 300 400 500 各管光吸收A520值 各测定管减空白A520值差 二、 绘制标准曲线 以光吸收值为纵坐标，酶活性单位为横坐标，在坐标纸上绘制各测得A520值与对应的酶活性单位数的标准曲线。 三、 样品及回收率测定 取10支干试管，按下表平行操作： 试管编号 试剂处理 Ⅰ标准空白管 Ⅱ标准管 Ⅲ血清空白管 Ⅳ血清管 Ⅴ血清加标准管 血清/mL - - 0.1 0.1 0.05 磷酸缓冲溶液/mL 0.10 - - - - 丙酮酸标准液/Ml - 0.10 - - 0.05 基质液/mL - 0.50 - 0.50 0.50 各管摇匀后,置37℃水浴,保温60min 基质液 0.50 - 0.50 - - 2,4-二硝基苯肼/mL 0.50 0.50 0.50 0.50 0.50 各管摇匀后,置37℃水浴,保温20min 0.4mol/L NaOH/mL 5.00 5.00 5.00 5.00 5.00 充分摇匀后,在520nm波长下比色,以蒸馏水校正光吸收为零 各管A520值 各测定管减空白A520值差 四、 结果计算 1. 标准曲线测定法 根据样品管A520值(已减去空白管A520) 查标准曲线,即得每100mL血清中转氨酶活性单位数. 2. 标准管测定法 每次测定酶活性时,同时用丙酮酸标准液(2μmol/mL)0.1mL,平行操作,即按上表操作,不做标准曲线,测定A520,按公式计算: 样品管A520 Ⅳ - Ⅲ 标准管A520 Ⅱ- Ⅰ GPT(U)/100mL 血清= ×200= ×200 用本法测得人血清GTP正常值为91±35.8(U)/100mL血清. 3. 计算回收率 回收率% = 实际测得值(样品加标准测得值) ×100 理论计算值[（样品+标准计算值）/2] |
4楼2011-11-16 10:11:19
曙光无限
新虫 (正式写手)
- 应助: 12 (小学生)
- 金币: 2462.6
- 散金: 713
- 红花: 2
- 帖子: 309
- 在线: 324.1小时
- 虫号: 1621471
- 注册: 2012-02-16
- 专业: 配位化学
5楼2014-10-21 15:33:35
美不美先看腿
金虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 1393.6
- 散金: 5
- 红花: 1
- 帖子: 131
- 在线: 25.5小时
- 虫号: 3802904
- 注册: 2015-04-11
- 性别: MM
- 专业: 植物营养学
6楼2017-04-08 10:50:49
美不美先看腿
金虫 (小有名气)
- 应助: 3 (幼儿园)
- 金币: 1393.6
- 散金: 5
- 红花: 1
- 帖子: 131
- 在线: 25.5小时
- 虫号: 3802904
- 注册: 2015-04-11
- 性别: MM
- 专业: 植物营养学
7楼2017-04-08 10:51:05
20