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luo_jiaojiao

木虫 (正式写手)

[求助] 请教大家一个关于calcein AM/PI染色活/死细胞的实验 已有5人参与

请教大家一个关于calcein AM/PI染色活/死细胞的实验
先是细胞爬片,在将纳米材料与细胞作用后加入按说明稀释好的calcein AM/PI试剂盒,孵育30min后洗涤,多聚甲醛固定,封片,照共聚焦。现在的问题是,照共聚焦的时候用488nm激发,能同时在相同的细胞上看到红色和绿色荧光,这跟文献报道的同一张图上红色是死细胞 绿色是活细胞不太一样,请问是为什么呢?
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zheng0419

新虫 (初入文坛)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 得勝的生命 at 2017-07-20 12:09:17
我没有固定,但是也会有这种现象。我认为是因为confocal的激发光强度比较高,才这样的。如果用一般的荧光显微镜,比较少看到这样子的情况,或者可以调整曝光时间来进行改善。我后来是改用一般荧光显微镜进行观察的 ...

我也有这个问题,但是我的是用普通的倒置荧光显微镜拍的,分别拍了不同激发下的细胞图,合并时发现同个细胞被两种染料都染色了,请问这个是怎么导致的呢

发自小木虫Android客户端
9楼2017-07-20 17:43:02
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查看全部 21 个回答

许为中-4759

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
live/dead,加染料避光30min就好,不需要后面的固定封片,固定就把细胞杀死了,后面选择合适的通道观察拍摄就好了
2楼2017-07-18 09:34:17
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得勝的生命

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
luo_jiaojiao: 金币+5 2017-07-20 02:24:04
这个染剂的激发光范围有一些重叠,用共聚焦显微镜看到的确实是这样的。没毛病。
3楼2017-07-18 12:40:44
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090420042

金虫 (著名写手)

死活染色,无需后面的固定。
固定导致细胞死亡,由于洗涤不完全,出现了残余染色剂把原来的活细胞重新染色的情况。
没事瞎溜达
4楼2017-07-18 15:33:32
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