| 查看: 2287 | 回复: 6 | |||
[交流]
PCR、琼脂糖凝胶电泳
|
|
电泳PCR技术核酸技术 PCR总也扩不出条带，到底是引物问题还是模板问题？求高手指点 最近做细菌DNA的PCR，条带总也不出来，有时候连二聚体都没有，单独用引物跑电泳，结果引物没有跑出条带，（如图一），用的是1.5的胶，中间是（100bpmarker），后来又重新用2.0的胶又做了一次，还是没有条带。还做了同一个模板温度梯度的PCR（从56到68度），Tm值分别为54.9，63.6（图二），目的片段大小左边是198bp，右边是158bp。感觉左边像是二聚体，右边也不对，左边第五条带感觉像是目的片段。PCR条件是94度预变性3分，94度变性30秒，56到68退火30秒，72度延伸一分钟。因为感觉左边第五条像一条目的片段。然后再次重新换模板验证第五条带的温度时是否为目的片段，2号和8号是可疑温度，两管是不同的模板，结果出来的图如图三，左边的条带不见了。加的体系及退火温度一致，却没有条带，泳道12号是另外一种菌目标片段大小158bp，但是目的条带很暗，左边也有些很暗的条带，不知道是什么。回来用提取的总DNA去跑电泳，结果如图四，各位大师们，有遇到同样的情况吗？求高手指点迷津，在此先谢谢大家了     发自小木虫IOS客户端 |
回复此楼» 猜你喜欢
Wnt-C59：PORCN靶向化学探针，Wnt信号通路阻断机制与科研应用全解析
已经有0人回复
-
Fexaramine：肠道限制性FXR化学探针，结构特征与信号通路研究全解析
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有230人回复
-
NVS-STG2：靶向STING跨膜域的分子胶类激动剂，结构特征与寡聚化机制研究全解析
已经有0人回复
-
DOTA-GPC3肽（CAS 3066439-94-6）：双功能分子探针前体的结构特征与标记应用解析
已经有0人回复
-
科研用 TLR7/8 双激动剂怎么选？现货与质控要点
已经有0人回复
-
SEL120-34A HCl：CDK8/CDK19高选择性激酶抑制剂
已经有0人回复
-
氢氧化钾活化操作
已经有18人回复
-
散金
已经有68人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- DNA的PCR产物跑琼脂糖凝胶电泳
已经有14人回复
- 新手请教关于总RNA提取以及琼脂糖凝胶电泳的问题！
已经有15人回复
- 条件、引物不变的情况下琼脂糖凝胶电泳条带弱； PCR产物测序双峰
已经有2人回复
- PCR琼脂糖凝胶电泳图希望大家帮我分析一下
已经有12人回复
- 琼脂糖电泳rna ，跑成这样，是怎么回事？求指导
已经有19人回复
- 国产高速离心机、pcr扩增仪和琼脂糖唐凝胶系统哪个好
已经有2人回复
2楼2017-07-16 15:27:33
3楼2017-07-16 23:30:34
送红花一朵 |
我的引物是公司给配好的10uM的，这个引物公司还可以，身边有人用的。今天又试着减少引物量，增加模板量，同时减少循环次数，退火温度也降低了一些，然后的条带如下图。左后一排应该就是我的目的条带。但是左边的那四个是一种细菌，但是还是二聚体。明天再优化  发自小木虫IOS客户端 |
» 本帖已获得的红花（最新10朵）
4楼2017-07-17 21:06:04
5楼2017-07-19 00:38:45
6楼2017-07-19 18:36:36
7楼2017-07-20 20:26:28
10