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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » PCR相关 » PCR反应内参CT值差异很大，如何理解
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w1angp2eng

金虫 (小有名气)

[交流] PCR反应内参CT值差异很大，如何理解 已有4人参与

初次做PCR，将反转录RNA浓度统一调整到900ng（20μl体系）后, 即45ng/μl。然后按照程序进行荧光定量PCR，但是在实际中，内参基因（β-actin）的CT值范围从16-21不等。主要疑问有两个，第一，内参CT值范围多大合适，是一致才可靠吗？第二，目的基因CT值，在实际测定中空白的CT值大约在30左右，那是否意味着目的基因大于30就没有太大意义，只是表明其表达量很低？
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1楼 2017-07-16 10:29:32
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zwydobi

新虫 (初入文坛)
★
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一般引物的CT值大于30的话，表达量低读数就读不出来了。
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2楼2017-07-18 15:01:02
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普通回帖

qpdvbep728
3楼2017-08-18 02:15:36
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qpdvbep728
4楼2017-08-18 16:52:46
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qpdvbep728
5楼2017-08-19 01:20:49
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qpdvbep728
6楼2017-08-20 16:33:50
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绿色心情cc

铜虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
反转录成cDNA是用相同量的RNA。不同的内参Ct不同。一般Ct差异不超过1，我做的在0.5内。

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7楼2017-08-20 17:04:12
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qpdvbep728
8楼2017-08-21 00:08:57
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qpdvbep728
9楼2017-08-21 18:29:25
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qpdvbep728
10楼2017-08-21 23:53:10
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