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w1angp2eng

金虫 (小有名气)

[交流] PCR反应内参CT值差异很大,如何理解 已有4人参与

初次做PCR,将反转录RNA浓度统一调整到900ng(20μl体系)后, 即45ng/μl。然后按照程序进行荧光定量PCR,但是在实际中,内参基因(β-actin)的CT值范围从16-21不等。主要疑问有两个,第一,内参CT值范围多大合适,是一致才可靠吗?第二,目的基因CT值,在实际测定中空白的CT值大约在30左右,那是否意味着目的基因大于30就没有太大意义,只是表明其表达量很低?
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zwydobi

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
一般引物的CT值大于30的话,表达量低读数就读不出来了。
2楼2017-07-18 15:01:02
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普通回帖
3楼2017-08-18 02:15:36
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4楼2017-08-18 16:52:46
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5楼2017-08-19 01:20:49
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6楼2017-08-20 16:33:50
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绿色心情cc

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
反转录成cDNA是用相同量的RNA。不同的内参Ct不同。一般Ct差异不超过1,我做的在0.5内。

发自小木虫Android客户端
7楼2017-08-20 17:04:12
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8楼2017-08-21 00:08:57
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9楼2017-08-21 18:29:25
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10楼2017-08-21 23:53:10
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