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w1angp2eng

金虫 (小有名气)

[交流] PCR反应内参CT值差异很大,如何理解 已有4人参与

初次做PCR,将反转录RNA浓度统一调整到900ng(20μl体系)后, 即45ng/μl。然后按照程序进行荧光定量PCR,但是在实际中,内参基因(β-actin)的CT值范围从16-21不等。主要疑问有两个,第一,内参CT值范围多大合适,是一致才可靠吗?第二,目的基因CT值,在实际测定中空白的CT值大约在30左右,那是否意味着目的基因大于30就没有太大意义,只是表明其表达量很低?
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绿色心情cc

铜虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
反转录成cDNA是用相同量的RNA。不同的内参Ct不同。一般Ct差异不超过1,我做的在0.5内。

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7楼2017-08-20 17:04:12
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zwydobi

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
一般引物的CT值大于30的话,表达量低读数就读不出来了。
2楼2017-07-18 15:01:02
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saveline

新虫 (初入文坛)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
基本上cDNA浓度扩大10倍,ct增大3.3,你可以提高cDNA的使用量

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12楼2017-10-24 09:35:10
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