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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » DNA重组 » 酶切
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18693104857

新虫 (初入文坛)

[求助] 酶切 已有2人参与

单酶切切完后为什么载体比空载体还要小呢？求助左边两个是空质粒，右边是单酶切

酶切


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1楼 2017-07-13 19:09:16
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zhouxfd

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
有可能因为你的载体上有两个该酶的位点，但切下来的片段大小恰好一致
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2楼2017-07-14 06:02:05
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fengshen2005

银虫 (正式写手)
你的载体大小与初始版本的大小是否一致

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3楼2017-07-14 06:36:52
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dgm1208

银虫 (小有名气)
你质粒大小是多少？讲道理单酶切后跑胶大小和质粒真实大小一致 如果你这个单酶切的大小和原质粒大小一至 就说明你空质粒提的有问题 如果单酶切和原质粒大小不一致说明酶切有问题

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科研路艰辛···
4楼2017-07-14 09:11:46
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dgm1208

银虫 (小有名气)
一致

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科研路艰辛···
5楼2017-07-14 09:12:05
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贱贱JMe

木虫 (小有名气)

教导主任

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不要纠结这个结果了，好好检查你的方案和数据，此次实验肯定是存在问题的。
如果使用相同的酶切位点插入目的片段，那么在酶切回收载体时就可以看到单切之后载体的大小。然后插入片段之后又用这个酶单切，可能因为插入的关系引入新的位点，造成双酶切而且片段大小无法分辨开来重合在一起显示为一条带。
重新选择单酶切位点，酶切验证构建好的质粒看结果是否符合预期结果。
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想做一位科研好人
6楼2017-07-14 10:47:10
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18693104857

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by fengshen2005 at 2017-07-14 06:36:52
你的载体大小与初始版本的大小是否一致

空载体大小一止呢

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7楼2017-07-16 07:51:50
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18693104857

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by fengshen2005 at 2017-07-14 06:36:52
你的载体大小与初始版本的大小是否一致

空载体一致呢

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8楼2017-07-16 07:54:49
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18693104857

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
2楼: Originally posted by zhouxfd at 2017-07-14 06:02:05
有可能因为你的载体上有两个该酶的位点，但切下来的片段大小恰好一致

我把空载体也用单酶切和双酶切都切了，跑出来大小跟空载体一样，说明载体上没有这两个酶的酶切位点。现在重组载体单酶切后变小了，重组载体双酶切后目的基因在目的位置，就是切开的质粒不在相应的位置上，分子量变小了

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9楼2017-07-16 07:57:37
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於怀龙

新虫 (小有名气)
现在有无缝克隆，不用酶切，单片段插入阳性率100%-三片段同时插入阳性率70%一次完成

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10楼2017-07-16 08:58:57
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