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1楼 2017-07-11 11:40:51

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tenghaiyan

铜虫 (小有名气)

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感觉酶切体系有问题，同楼上。另外切不下来可以直接用质粒做模板扩下来

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3楼2017-07-15 09:17:19

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晋鹏

版主 (知名作家)

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【答案】应助回帖

★ ★ ★
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西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2017-07-12 23:15:10

1、限制酶活性定义的1 U是在37℃条件下，经1小时，将1 μg  DNA完全切断的酶量，对所有的底物DNA都可以完全切开吗?

由于底物DNA的不同，其含有的酶切位点的摩尔浓度不同，空间结构也不相同，这些，都会对酶切反应的速度产生影响，所以，相同的酶量，不一定能将不同的底物切开。

2、一般反应体系：
NotI 1 μl
10×M Buffer 2 μl
DNA                         ≤1 μg
灭菌水                 up to 20 μl

3、反应时间：
在上述20 μl的反应体系中，37℃反应5分钟可以完全切断λDNA，满足各种实验需求。针对特殊酶切底物DNA，如果得不到良好的酶切效果时，可以将反应时间延长至1小时。

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及时行乐，人生不留遗憾！

2楼2017-07-12 14:52:31

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tanya1993

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tenghaiyan

晋鹏

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