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tanya1993

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晋鹏

版主 (知名作家)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
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西门吹雪170: 金币+3, 鼓励回帖交流 2017-07-12 23:15:10
1、限制酶活性定义的1 U是在37℃条件下,经1小时,将1 μg  DNA完全切断的酶量,对所有的底物DNA都可以完全切开吗?

由于底物DNA的不同,其含有的酶切位点的摩尔浓度不同,空间结构也不相同,这些,都会对酶切反应的速度产生影响,所以,相同的酶量,不一定能将不同的底物切开。

2、一般反应体系:  
NotI 1 μl  
10×M Buffer 2 μl  
DNA                         ≤1 μg  
灭菌水                 up to 20 μl

3、反应时间: 
在上述20 μl的反应体系中,37℃反应5分钟可以完全切断λDNA,满足各种实验需求。针对特殊酶切底物DNA,如果得不到良好的酶切效果时,可以将反应时间延长至1小时。
及时行乐,人生不留遗憾!
2楼2017-07-12 14:52:31
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tenghaiyan

铜虫 (小有名气)

感觉酶切体系有问题,同楼上。另外切不下来可以直接用质粒做模板扩下来

发自小木虫Android客户端
3楼2017-07-15 09:17:19
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