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天宇201266

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[求助] 不对称PCR扩增出单链DNA后，胶回收浓度很低已有2人参与

最近做不对称PCR扩增单链DNA，不对称PCR产物经琼脂糖凝胶电泳回收后，浓度很低，这是为什么？求大神指导，单链DNA是被降解了吗？还是因为自己所有的试剂盒不行，自己用的试剂盒是天根胶回收试剂盒，求指导！！！

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在路上。。。

1楼 2017-07-10 14:00:16

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晋鹏

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【答案】应助回帖

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天宇201266: 金币+2 2017-07-13 08:06:09

1、其实DNA浓度低也不是就不能用，你只要上1ul跑电泳能看见条带就行了。浓度低连接时可以扩大体系，用20-30ul体系，不加水了，全用DNA补齐，连接酶也多加。

2、如果试剂盒没问题的话，考虑一下片段大小。如果太小的话（500bp或以下），加入结合液后，向其中再加入1/3体积的异丙醇，然后按操作说明书操作。溶胶一定要非常仔细，并且彻底！溶胶以后，注意体系的pH值，如果pH值太高，也会影响回收。

3、简单点的就是用胶回收盒子里面的柱子重新富集一遍。加大PCR产物。我一般都是做50ul体系，做几个，跑胶后，切胶一起回收，电泳检测浓度。