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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » pcr扩增时，电泳跑胶全部是拖带，我的模板是反转录CDNA，...
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13919441827

新虫 (初入文坛)

[求助] pcr扩增时，电泳跑胶全部是拖带，我的模板是反转录CDNA，... 已有3人参与

pcr扩增时，电泳跑胶全部是拖带，我的模板是反转录CDNA，加2微升，，引物各0.5微升，Taq酶12.5微升，目的片段是1437bp。退火温度是62度30秒，

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1楼 2017-06-18 08:58:42
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bbass533

禁虫 (小有名气)
感谢参与，应助指数 +1
本帖内容被屏蔽
2楼2017-06-19 12:52:47
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stabilized

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
首先，你需要阳性对照（确定条件）和阴性对照（确定杂带）来判断一下
其次，你的产物1400+，比较大，你再明确一下每阶段的时间
还有，那个不叫Taq酶，叫Pre Mix，主要是酶的功能，还有dNTP，体积大是因为Buffer比较多
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坚持！
3楼2017-06-19 14:07:31
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hx814102

新虫 (正式写手)
模板1微升，引物1微升，退火53度45秒，延伸72度2分钟，试试

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Everydayisanewday!
4楼2017-06-19 18:27:25
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红灯绿草

新虫 (初入文坛)
老师  我想问下 我们跑pcr跑不出东西 Marker能跑出带 DNA呆跑没问题 用的是PCR magic Mix3.0 用10微升 引物用BAr 用0.2微升就是不知道问题出在哪里

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5楼2017-07-11 09:45:20
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PattyGao

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

模板浓度过高，降低浓度试试，还有就是酶浓度过高
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6楼2017-07-11 09:47:49
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