24小时热门版块排行榜    

查看: 1671  |  回复: 5

13919441827

新虫 (初入文坛)

[求助] pcr扩增时,电泳跑胶全部是拖带,我的模板是反转录CDNA,... 已有3人参与

pcr扩增时,电泳跑胶全部是拖带,我的模板是反转录CDNA,加2微升,,引物各0.5微升,Taq酶12.5微升,目的片段是1437bp。退火温度是62度30秒,

发自小木虫Android客户端
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

bbass533

禁虫 (小有名气)

感谢参与,应助指数 +1
本帖内容被屏蔽

2楼2017-06-19 12:52:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

stabilized

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
首先,你需要阳性对照(确定条件)和阴性对照(确定杂带)来判断一下
其次,你的产物1400+,比较大,你再明确一下每阶段的时间
还有,那个不叫Taq酶,叫Pre Mix,主要是酶的功能,还有dNTP,体积大是因为Buffer比较多
坚持!
3楼2017-06-19 14:07:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hx814102

新虫 (正式写手)

模板1微升,引物1微升,退火53度45秒,延伸72度2分钟,试试

发自小木虫IOS客户端
Everydayisanewday!
4楼2017-06-19 18:27:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

红灯绿草

新虫 (初入文坛)

老师  我想问下 我们跑pcr跑不出东西 Marker能跑出带 DNA呆跑没问题 用的是PCR magic Mix3.0 用10微升 引物用BAr 用0.2微升就是不知道问题出在哪里

发自小木虫Android客户端
5楼2017-07-11 09:45:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

PattyGao

新虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

模板浓度过高,降低浓度试试,还有就是酶浓度过高
6楼2017-07-11 09:47:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 13919441827 的主题更新
信息提示
请填处理意见