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新虫 (初入文坛)

[求助] pcr扩增时,电泳跑胶全部是拖带,我的模板是反转录CDNA,... 已有3人参与

pcr扩增时,电泳跑胶全部是拖带,我的模板是反转录CDNA,加2微升,,引物各0.5微升,Taq酶12.5微升,目的片段是1437bp。退火温度是62度30秒,

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红灯绿草

新虫 (初入文坛)

老师  我想问下 我们跑pcr跑不出东西 Marker能跑出带 DNA呆跑没问题 用的是PCR magic Mix3.0 用10微升 引物用BAr 用0.2微升就是不知道问题出在哪里

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5楼2017-07-11 09:45:20
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bbass533

禁虫 (小有名气)

感谢参与,应助指数 +1
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2楼2017-06-19 12:52:47
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stabilized

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
首先,你需要阳性对照(确定条件)和阴性对照(确定杂带)来判断一下
其次,你的产物1400+,比较大,你再明确一下每阶段的时间
还有,那个不叫Taq酶,叫Pre Mix,主要是酶的功能,还有dNTP,体积大是因为Buffer比较多
坚持!
3楼2017-06-19 14:07:31
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hx814102

新虫 (正式写手)

模板1微升,引物1微升,退火53度45秒,延伸72度2分钟,试试

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Everydayisanewday!
4楼2017-06-19 18:27:25
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